Question

16．甘藍自花傳粉后，花粉在雌蕊柱頭上的萌發(fā)受阻會導致自交不親和，這一甘藍柱頭細胞中MLPK基因的表達有關．科研人員將反義MLPK基因表達載體導入甘藍細胞，轉錄出的反義mRNA與甘藍細胞中MLPK基因轉錄的mRNA互補，阻止mRNA的翻譯，可增加甘藍自交結籽數量．相關操作過程如圖所示，回答下列問題．  
（1）圖中①表示cDNA（或者互補DNA）；PCR過程需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶． 
（2）在構建表達載體時，應將反義MLPK基因與甘藍柱頭細胞中特異表達的啟動子等調控組件重組在一起． 
（3）科研人員依據重組載體的結構特點，用添加除草劑的培養(yǎng)基篩選出導入載體的甘藍細胞．組織培養(yǎng)時，誘導細胞脫分化形成愈傷組織，通過提高培養(yǎng)基中細胞分裂素（填“生長素”或“細胞分裂素”）的含量誘導再分化和芽原基的形成，最終獲得甘藍植株．  
（4）要在個體生物學水平上鑒定反義MLPK基因是否發(fā)揮作用，方法是統計轉基因甘藍植株自花傳粉（或自交）后的結籽數量，并與非轉基因甘藍植株比較．

Answer 1

分析 分析題圖：該過程首先從甘藍雌蕊柱頭細胞提取總RNA，利用反轉錄法獲得cDNA（圖中①），在運用PCR技術對目的基因進行擴增，最后利用限制酶和DNA連接酶將反義MLPK基因與質粒進行重組．
植物組織培養(yǎng)過程中需要利用生長素和細胞分裂素，其中生長素能夠促進根的分化，而細胞分裂素能夠促進芽的分化．

解答 解：（1）圖中①表示通過反轉錄法獲得的cDNA（或者互補DNA）；PCR過程中需要高溫解鏈，因此所運用的DNA聚合酶必須是熱穩(wěn)定DNA聚合酶． 
（2）該基因工程的目的是該基因能夠在甘藍柱頭細胞中表達，因此在構建表達載體時，需要應將反義MLPK基因與甘藍柱頭細胞中特異表達的啟動子等調控組件重組在一起． 
（3）分析圖中重組質�？芍�，該表達載體上的標記基因為“抗除草劑基因”，因此科研人員需要用添加除草劑的培養(yǎng)基篩選出導入載體的甘藍細胞．組織培養(yǎng)時，誘導細胞脫分化形成愈傷組織，通過提高培養(yǎng)基中細胞分裂素的含量誘導再分化和芽原基的形成，最終獲得甘藍植株．  
（4）要在個體生物學水平上鑒定反義MLPK基因是否發(fā)揮作用，可以統計轉基因甘藍植株自花傳粉（或自交）后的結籽數量，并與非轉基因甘藍植株比較．
故答案為：
（1）cDNA（或者互補DNA）    熱穩(wěn)定DNA聚合酶
（2）甘藍柱頭
（3）除草劑   愈傷組織   細胞分裂素
（4）統計轉基因甘藍植株自花傳粉（或自交）后的結籽數量，并與非轉基因甘藍植株比較

點評 本題考查了基因工程的有關知識，要求考生能夠掌握基因工程的操作步驟，識記目的基因獲取的幾種方法，掌握目的基因檢測和鑒定的分子水平和個體水平的方法，并結合圖示信息準確答題．