Question

11．艾滋病病毒（HIV）外殼的包膜上有多種蛋白質(zhì)，其中包膜糖蛋白（env）基因編碼gpl60蛋白，進一步加工成gpl20蛋白，具有較強的抗原性．制備抗HIV gpl20的單克隆抗體，為艾滋病的治療帶來希望．請回答下列問題：
（1）若利用動物細胞工程制備抗HIV gpl20的單克隆抗體，涉及到的技術手段主要有動物細胞培養(yǎng)技術、動物細胞融合技術．
（2）細胞融合常用的生物誘導劑是滅活的病毒．融合后需要用特定的選擇性培養(yǎng)基篩選，只有融合的雜種細胞才能生長，這種細胞的特點是既能大量繁殖，又能產(chǎn)生抗HIVgpl20抗體．
（3）若要大量制備該單克隆抗體，可將篩選出來的細胞進行體外培養(yǎng)，在培養(yǎng)液中通入一定濃度的CO₂，主要作用是維持培養(yǎng)液的pH．
（4）科研人員設想用基因工程制備能表達抗HIV pl20抗體的重組細胞，獲得目的基因可利用PCR技術擴增，需要在反應體系中添加的有機物有引物和模板DNA、Taq酶和4種脫氧核苷酸．利用顯微注射法將目的基因導入骨髓瘤細胞．基因工程的核心是基因表達載體的構建．

Answer 1

分析 1、單克隆抗體的制備過程中利用了動物細胞融合技術和動物細胞培養(yǎng)技術，在制備的過程中的兩次篩選考生必須識記，同時在進行雜交瘤細胞體外培養(yǎng)的過程需注意培養(yǎng)條件．
2、有關PCR技術的相關知識：
（1）概念：PCR全稱為聚合酶鏈式反應，是一項在生物體外復制特定DNA的核酸合成技術．
（2）原理：DNA復制．
（3）前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物．
（4）過程：①高溫變性：DNA解旋過程；②低溫復性：引物結合到互補鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈．PCR擴增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開．

解答 解：（1）單克隆抗體的制備過程中，首先利用了動物細胞融合技術獲得雜交細胞，然后利用動物細胞培養(yǎng)技術篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞．
（2）細胞融合常用的生物誘導劑是滅活的病毒．融合后需要用特定的選擇性培養(yǎng)基篩選，只有融合的雜交瘤細胞才能生長，該細胞的特點是既能大量繁殖，又能產(chǎn)生抗HIV gpl20抗體．
（3）若要大量制備該單克隆抗體，可將篩選出來的細胞進行體外培養(yǎng)，在培養(yǎng)液中通入一定濃度的CO₂，來維持培養(yǎng)液的pH．
（4）PCR技術擴增目的基因的過程中，需要在反應體系中添加兩種引物和模板DNA、Taq酶和4種脫氧核苷酸．利用顯微注射法將目的基因導入骨髓瘤細胞．基因工程的核心是基因表達載體的構建．
故答案為：
（1）動物細胞培養(yǎng)技術、動物細胞融合技術
（2）滅活的病毒       雜種細胞    既能大量繁殖，又能產(chǎn)生抗HIV gpl20抗體
（3）維持培養(yǎng)液的pH
（4）引物和模板DNA     顯微注射    基因表達載體的構建

點評 本題考查了單克隆抗體的制備以及基因工程的有關知識，要求考生能夠識記單克隆抗體的制備過程以及應用的相關技術，掌握PCR技術的原理和條件，識記基因工程的操作步驟等，再結合所學知識準確答題．