Question

12．基因工程的設計和操作中，啟動子是運載體的重要組成部分．如圖是一種克隆啟動子的辦法，請據(jù)圖分析回答：

（1）啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位．若要獲得啟動子的堿基序列不能依據(jù)基因表達產(chǎn)物推知，原因是基因中啟動子的堿基序列不能被轉錄．
（2）過程①、③分別使用的限制酶是BamHⅠHindⅢ．
（3）過程④的原理是DNA雙鏈復制，需要用到的工具酶是Taq酶等熱穩(wěn)定聚合酶．
（4）過程⑤中克隆的啟動子與外源基因連接時，根據(jù)外源基因的核苷酸序列設計引物a．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位．基因中啟動子的堿基序列不能被轉錄，因此要獲得啟動子的堿基序列不能依據(jù)基因表達產(chǎn)物推知．
（2）根據(jù)過程①后的結果可知，該過程使用的限制酶是BamHⅠ；根據(jù)過程③的結果可知，該過程使用的限制酶是HindⅢ．
（3）過程④采用PCR技術進行擴增，其原理是DNA雙鏈復制；PCR操作是在較高溫度下進行的，因此需要用到的工具酶是Taq酶等熱穩(wěn)定聚合酶．
（4）PCR技術的前提條件是要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物．因此，過程⑤中克隆的啟動子與外源基因連接時，根據(jù)外源基因的核苷酸序列設計引物a．
故答案為：
（1）RNA聚合酶     基因中啟動子的堿基序列不能被轉錄
（2）BamHⅠHindⅢ
（3）DNA雙鏈復制     Taq酶等熱穩(wěn)定聚合酶
（4）外源基因的核苷酸序列

點評 本題結合圖解，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結合圖中信息準確答題．