Question

11．某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)材料分離純化乳酸菌．分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣．回答下列問(wèn)題：
（1）分離純化乳酸菌時(shí)，首先箝要用無(wú)菌水對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋．梯度稀釋的目的是泡菜濾液中乳酸菌的濃度高，直接分離很難分離到單個(gè)菌落（為了聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落）．
（2）推測(cè)在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用除了可以中和產(chǎn)生的乳酸以外，還可以鑒別乳酸菌．分離純化時(shí)應(yīng)挑選出具有透明圈的菌落作為候選菌．
（3）若該同學(xué)采用稀釋涂布平板法來(lái)檢測(cè)泡菜濾液中乳酸菌的含量，先將lmL泡菜濾液稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0．lmL稀釋液，經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37．據(jù)此可得出每毫升濾液中的活菌數(shù)為3.8×10⁴個(gè)．
（4）若對(duì)篩選得到的乳酸菌進(jìn)一步純化，宜采用的純化方法是平板劃線法．乳酸菌在20℃長(zhǎng)期保存時(shí)，菌液中常需要加入一定量的甘油．

Answer 1

分析 1、稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)時(shí)，在每一個(gè)梯度濃度內(nèi)，至少要涂布3個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30～300的進(jìn)行記數(shù)，求起平均值，再通過(guò)計(jì)算得出土壤中細(xì)菌總數(shù)．
2、泡菜發(fā)酵的實(shí)驗(yàn)原理：
（1）乳酸菌在無(wú)氧條件下，將糖分解為乳酸．
（2）利用乳酸菌制作泡菜的過(guò)程中會(huì)引起亞硝酸鹽的含量的變化．
溫度過(guò)高，食鹽用量不足10%、腌制時(shí)間過(guò)短，容易造成細(xì)菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加．一般在腌制10天后，亞硝酸鹽的含量開(kāi)始下降．
（3）測(cè)定亞硝酸鹽含量的原理：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液目測(cè)比較，估算泡菜中亞硝酸鹽含量．

解答 解：（1）分離純化乳酸菌時(shí)，首先要用無(wú)菌水對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋．泡菜濾液中乳酸菌的濃度高，直接分離很難分離到單個(gè)菌落，因此需要對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋．
（2）在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用是中和乳酸菌代謝過(guò)程中產(chǎn)生的乳酸和利于乳酸菌的識(shí)別和分離；分離純化時(shí)應(yīng)挑選出在平板上有透明圈的菌落作為候選菌．
（3）若該同學(xué)采用稀釋涂布平板法來(lái)檢測(cè)泡菜濾液中乳酸菌的含量，先將lmL泡菜濾液稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0．lmL稀釋液，經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37．據(jù)此可得出每毫升濾液中的活菌數(shù)為=（39+38+37）÷3÷0.1×100=3.8×10⁴個(gè)．
（4）若對(duì)篩選得到的乳酸菌進(jìn)一步純化，宜采用的純化方法是平板劃線法．乳酸菌在20℃長(zhǎng)期保存時(shí)，菌液中常需要加入一定量的甘油．
故答案為：
（1）泡菜濾液中乳酸菌的濃度高，直接分離很難分離到單個(gè)菌落（為了聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落）
（2）鑒別乳酸菌     具有透明圈
（3）3.8×10⁴
（4）平板劃線法     甘油

點(diǎn)評(píng) 本題考查微生物的分離與培養(yǎng)以及泡菜制作的相關(guān)知識(shí)，對(duì)于此類試題，需要考生注意的細(xì)節(jié)較多，如實(shí)驗(yàn)的原理、實(shí)驗(yàn)選用的材料、實(shí)驗(yàn)采用的試劑及試劑的作用、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象等，需要考生在平時(shí)的學(xué)習(xí)過(guò)程中注意積累．