Question

重組酵母乙肝疫苗是通過轉(zhuǎn)基因的方法將人乙肝表面抗原（HbsAg）的基因?qū)�入畢赤酵母中獲得的，具有原料易得、產(chǎn)量大、安全、高效等特點(diǎn)．如圖是重組酵母乙肝疫苗的生產(chǎn)過程．
（1）與大腸桿菌相比，畢赤酵母菌具有

 

等細(xì)胞器，用其作為基因工程的受體細(xì)胞，可以對(duì)合成的乙肝表面抗原進(jìn)行

 

，并分泌到細(xì)胞外，便于提取．
（2）圖中氨芐青霉素抗性基因作為

 

，作用是

 

．
（3）PCR技術(shù)利用

 

原理，該技術(shù)使用的工具酶是

 

．
（4）從資料3可以看出，不同種限制性內(nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的末端類型有

 

和

 

．試寫出AvrⅡ酶切割后產(chǎn)生的末端片段：

 

（5）為避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化，在將HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組時(shí)，應(yīng)該用限制酶

 

處理HBsAg基因兩側(cè)．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：分析圖表：構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，使用限制酶SacⅠ切割會(huì)破壞啟動(dòng)子，使用限制酶BglⅡ切割會(huì)導(dǎo)致重組質(zhì)粒丟失啟動(dòng)子和抗性基因，因此為避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化，在將HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組時(shí)，應(yīng)該用限制酶SnaBⅠ、AvrⅡ處理HBsAg基因兩側(cè)．

解答： 解：（1）大腸桿菌屬于原核生物，其細(xì)胞中只有核糖體一種細(xì)胞器，而畢赤酵母菌屬于真核生物，其細(xì)胞中具有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等細(xì)胞器，用其作為基因工程的受體細(xì)胞，可以對(duì)合成的乙肝表面抗原進(jìn)行加工（修飾），并分泌到細(xì)胞外，便于提�。�
（2）圖中氨芐青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因，作用是鑒定受體細(xì)胞中是否含有人乙肝表面抗原（HbsAg）的基因，從而將含有人乙肝表面抗原（HbsAg）的基因的細(xì)胞篩選出來．
（3）PCR技術(shù)的原理是DNA復(fù)制；該技術(shù)是在較高溫度條件下進(jìn)行的，因此需要使用熱穩(wěn)定DNA聚合酶．
（4）從資料3可以看出，不同種限制性內(nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的末端類型有平末端和黏性末端．AvrⅡ酶切割后產(chǎn)生的黏性末端，其產(chǎn)生的末端片段為：．
（5）由以上分析可知，為避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化，在將HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組時(shí)，應(yīng)該用限制酶SnaBⅠ、AvrⅡ處理HBsAg基因兩側(cè)．
故答案為：
（1）內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體    加工（修飾）
（2）標(biāo)記基因    鑒定受體細(xì)胞中是否含有人乙肝表面抗原（HbsAg）的基因，從而將含有人乙肝表面抗原（HbsAg）的基因的細(xì)胞篩選出來
（3）DNA復(fù)制    熱穩(wěn)定DNA聚合酶
（4）平末端    黏性末端  
（5）SnaBⅠ、AvrⅡ

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合圖表，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、適宜的工具及具體的操作步驟，能結(jié)合圖中和表中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱理解和應(yīng)用層次的考查．