Question

6．解磷微生物能分解有機磷，可降低水體富營養(yǎng)化程度．如圖是從湖泊污泥中篩選解磷微生物的過程示意圖，下表是分離純化的結(jié)果．請回答下列問題：
記錄項目：透明圈直徑/菌落直徑

菌落編號	1	2	3
48h	1.6	2.8	3.0
72h	2.2	1.2	5.0
96h	2.3	1.2	4.2

（1）培養(yǎng)基的成分主要有牛肉膏、蛋白胨、NaCl及無菌卵黃液，其中卵黃主要提供有機磷．從土壤中富集解磷微生物時，應(yīng)選用液體（填“固體”或“液體”）培養(yǎng)基．
（2）在倒平板前，應(yīng)對玻璃器皿和培養(yǎng)基滅菌，滅菌方法是高壓蒸汽滅菌．配制成10^-1濃度稀釋液時，用無菌移液管從富集液的上清液中吸取1mL，移入盛有9mL無菌水的試管中，并依次配制10^-2～10^-10的梯度稀釋液．
（3）過程③為菌種分離純化的過程，接種方法分別為平板劃線法，平板分離法進行如下操作，排序最合理的是②①④①③②．

（4）分析菌種的分離純化結(jié)果，應(yīng)選擇為3號菌落進行擴大生產(chǎn)，原因是透明圈大，解磷能力強（具有相對較大的透明圈，解磷能力強）．

Answer 1

分析 培養(yǎng)基的成分一般包括水、碳源、氮源及無機鹽，對于自養(yǎng)型生物，一般不加碳源，因為能利用二氧化碳，對于固氮微生物，一般不加氮源，如圓褐固氮菌．
微生物的實驗室培養(yǎng)中涉及無菌操作的技術(shù)，其中主要涉及消毒和滅菌的方法，消毒是使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部部分微生物不能殺滅芽孢和孢子，滅菌是使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子，常用的消毒方法有煮沸消毒法、化學(xué)藥劑消毒和巴氏消毒法，常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌；微生物的實驗室培養(yǎng)的關(guān)鍵就是防止外來雜菌的入侵．
常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，稀釋涂布平板法常用來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目．

解答 解：（1）培養(yǎng)基的成分主要有牛肉膏、蛋白胨、NaCl及無菌卵黃液，其中卵黃主要提供有機磷．從土壤中富集解磷微生物時，應(yīng)選用液體培養(yǎng)基．
（2）滅菌是指用物理和化學(xué)方法殺死物體表面和內(nèi)部的所有微生物，包括致病和非致病微生物以及芽孢，所以用高壓蒸汽滅菌對玻璃器皿和培養(yǎng)基滅菌．由于依次配制10^-2～10^-10的梯度稀釋液，所以配制成l0^-1濃度稀釋液時，需要用無菌移液管從富集液的上清液中吸取1mL，移入盛有9mL無菌水的試管中．
（3）過程②、③為菌種分離純化的過程，接種方法分別為稀釋涂布平板法和平板劃線法．平板劃線的操作的基本步驟是：（一）右手持接種環(huán)，經(jīng)火焰滅菌，待涼后，在火焰旁打開盛有菌液的試管棉塞，并將試管口過火焰，將以冷卻的接種環(huán)伸入菌液，沾取一環(huán)菌液，將試管口過火焰丙塞上棉塞．（二）左手斜持瓊脂平板，皿蓋打開一條縫，右手于火焰近處將接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋，接種環(huán)不應(yīng)劃破培養(yǎng)基表面．（三）燒灼接種環(huán)，殺滅環(huán)上殘留菌液，待冷卻（是否冷卻，可先在培養(yǎng)基邊緣處試觸，若瓊脂溶化，表示未涼，稍等再試），從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)內(nèi)劃線，重復(fù)以上操作，在第三四五區(qū)內(nèi)劃線，注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連．（四）將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)為分離純化優(yōu)良酵母菌品種．所以采用平板劃線法進行如圖操作排序最合理的是②①④①③②．
（4）根據(jù)題意和圖表分析可知：3號菌落中的透明圈直徑即菌落直徑最大，說明解磷能力最強，所以分析菌種的分離純化結(jié)果，應(yīng)選擇為3號菌落．
故答案為：
（1）卵黃     液體
（2）高壓蒸汽滅菌      9
（3）平板劃線法     ②①④①③②
（4）3      透明圈大，解磷能力強（具有相對較大的透明圈，解磷能力強）

點評 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)等相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的識圖能力和判斷能力，運用所學(xué)知識綜合分析問題和解決問題的能力．