Question

8．請(qǐng)根據(jù)所學(xué)知識(shí)回答下列生物技術(shù)實(shí)踐中的有關(guān)問題：
（1）科技小組想從哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞中提取蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定；采用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)，當(dāng)相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)通過凝膠時(shí)，相對(duì)分子質(zhì)量�。ā按蟆薄ⅰ靶　保┮苿�(dòng)速度較慢．
（2）科技小組在進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)中：欲測(cè)定飲用水中大腸桿菌數(shù)目，將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色．測(cè)定某一土壤樣品中的活菌數(shù)時(shí)應(yīng)采用稀釋涂布平板法，在4個(gè)對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為10⁴的培養(yǎng)基中均接種0.1ml稀釋后的土壤樣品溶液，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為11、176、128、161，計(jì)算每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為155×10⁷個(gè)．
（3）篩選纖維素分解菌常用剛果紅染色法，接種過程要注意對(duì)接種器材進(jìn)行滅菌．

Answer 1

分析 1、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法
（1）顯微鏡直接計(jì)數(shù)法
 ①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)； ③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌．
（2）間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）
 ①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌．通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌．
②操作
a、設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性．
b、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)．
③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)．
2、分解纖維素的微生物的分離實(shí)驗(yàn)的原理：
①土壤中存在著大量纖維素分解酶，包括真菌、細(xì)菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維素酶．纖維素酶是一種復(fù)合酶，可以把纖維素分解為纖維二糖，進(jìn)一步分解為葡萄糖使微生物加以利用，故在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長(zhǎng)，其他微生物則不能生長(zhǎng)．
②在培養(yǎng)基中加入剛果紅，可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，紅色復(fù)合物不能形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，從而可篩選纖維素分解菌．

解答 解：（1）血紅蛋白的提取和分離一般分為：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定四步；凝膠色譜法（分配色譜法）的原理：分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動(dòng)快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長(zhǎng)，流動(dòng)慢．因此采用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時(shí)，當(dāng)相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)通過凝膠時(shí)，相對(duì)分子質(zhì)量小移動(dòng)速度較慢．
（2）欲測(cè)定飲用水中大腸桿菌數(shù)目，將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色．測(cè)定某一土壤樣品中的活菌數(shù)時(shí)應(yīng)采用稀釋涂布平板法，在4個(gè)對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為10⁴的培養(yǎng)基中均接種0.1ml稀釋后的土壤樣品溶液，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為11、176、128、161，為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，因此每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為9176+128+161）÷3×10⁷=155×10⁷個(gè)．
（3）剛果紅染液可以和纖維素結(jié)合形成紅色的復(fù)合物，纖維素分解菌產(chǎn)生的纖維素酶可以將纖維素分解為葡萄糖而使菌落周圍出現(xiàn)透明圈，利用這一點(diǎn)，可以使用剛果紅染液鑒別纖維素分解菌．接種過程要注意對(duì)接種器材進(jìn)行滅菌．
故答案為：
（1）純化和純度鑒定       小
（2）伊紅美藍(lán)    黑      稀釋涂布平板    155
（3）剛果紅染色法      滅菌

點(diǎn)評(píng) 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)等知識(shí)，對(duì)于此類試題，需要考生注意的細(xì)節(jié)較多，如實(shí)驗(yàn)的原理、實(shí)驗(yàn)采用的方法、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象等，需要考生在平時(shí)的學(xué)習(xí)過程中注意積累．