Question

以下是有關(guān)現(xiàn)代生物科技的兩個(gè)問題，請(qǐng)回答：
Ⅰ．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)，在動(dòng)物細(xì)胞工程的其他技術(shù)中都得到廣泛應(yīng) 用，例如：提供供體細(xì)胞進(jìn)行核移植；制備單克隆抗體等等．下面是與動(dòng)物細(xì)胞工程有關(guān)的問 題，請(qǐng)分析回答：
（1）在進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，首先要將動(dòng)物組織剪碎，然后用

 

處理，以使其分散成單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液．
（2）氣體環(huán)境中CO₂的作用是

 

．
（3 ）應(yīng)用于核移植的供體細(xì)胞一般選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，原因是10代以后細(xì)胞可能發(fā)生

 

（4）單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，具有

 

的特點(diǎn)．
Ⅱ轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過程如下圖所示．圖中PstI、SmaI、EcoRI，ApaI等為限制酶，質(zhì)粒和抗病基因上的箭頭表示限制酶的切割位點(diǎn)．下圖表示四種限制酶的識(shí)別序列及酶切點(diǎn)．

限制酶	PstI	SmaI	EcoRI	ApaL
識(shí)別序列及酶切位點(diǎn)

（1）若要獲得抗病基因，能否用限制酶SmaI對(duì)圖中對(duì)應(yīng)的位點(diǎn)進(jìn)行切割？

 

．
要獲得含抗病基因的重組質(zhì)粒能否用PstI、ApaI限制酶切割質(zhì)粒？

 

．
（2）卡那霉素會(huì)抑制香蕉愈傷組織細(xì)胞的生長，根據(jù)這一原理可以利用含卡3卩霉素的培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入重組質(zhì)粒的香蕉細(xì)胞．由此推斷重組質(zhì)粒中應(yīng)含有

 

基因，作為標(biāo)記基因．
（3）②、③階段是否可使用同種培養(yǎng)基？

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)過程,基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)．
2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件：①無菌、無毒的環(huán)境；②營養(yǎng)；③溫度和pH；④氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2．
3、分析題圖：含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位點(diǎn)，其中SmaⅠ酶的切割位點(diǎn)位于抗病基因（目的基因）上；質(zhì)粒含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ的切割位點(diǎn)．所以要活動(dòng)重組質(zhì)粒，可以用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ進(jìn)行切割．①→②表示脫分化過程、②→③表示再分化過程、④是新植體．

解答： 解：Ⅰ．（1）在進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，首先要將動(dòng)物組織剪碎，然后用胰蛋白酶處理，以使其分散成單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液．
（2）氣體環(huán)境中CO₂的作用是維持培養(yǎng)液中的pH．
（3）應(yīng)用于核移植的供體細(xì)胞一般選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，原因是10代以后細(xì)胞可能發(fā)生遺傳物質(zhì)的突變（遺傳物質(zhì)的改變）．
（4）單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高的特點(diǎn)．
Ⅱ．（1）因?yàn)橄拗泼窼maⅠ的切割位點(diǎn)位于抗病基因上，對(duì)SmaⅠ位點(diǎn)進(jìn)行切割破壞了抗病基因的結(jié)構(gòu)，所以要獲得抗病基因，不能否用限制酶SmaⅠ對(duì)圖中對(duì)應(yīng)的位點(diǎn)進(jìn)行切割．要獲得含抗病基因的重組質(zhì)粒，也不能否用PstⅠ、ApaⅠ限制酶切割質(zhì)粒，因?yàn)楹�有抗病基因的外源DNA分子上沒有ApaⅠ限制酶切割位點(diǎn)．
（2）欲利用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細(xì)胞，重組質(zhì)粒中應(yīng)同時(shí)含有抗卡那霉素基因，作為標(biāo)記基因．
（3）決定植物脫分化和再分化的關(guān)鍵因素是植物激素的種類和比例，特別是生長素和細(xì)胞分裂素的協(xié)同作用在組織培養(yǎng)過程中非常重要．②、③階段培養(yǎng)基中生長素與細(xì)胞分裂素的比值不同，因此這兩個(gè)階段不能是用同種培養(yǎng)基．
故答案為：
Ⅰ．（1）胰蛋白酶
（2）維持培養(yǎng)液中的pH
（3）遺傳物質(zhì)的突變（遺傳物質(zhì)的改變也可）
（4）特異性強(qiáng)、靈敏度高
Ⅱ．（1）不能        不能
（2）抗卡那霉素 
（3）不能

點(diǎn)評(píng)：本題考查了動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，結(jié)合轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過程圖考查了基因工程和植物組織培養(yǎng)技術(shù)的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生的識(shí)圖能力和理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)與觀點(diǎn)，對(duì)某些生物學(xué)問題進(jìn)行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結(jié)論．