Question

14．單克隆抗體在醫(yī)療、診斷等方面發(fā)揮著越來越重要的作用．英國(guó)科學(xué)家米爾斯坦和科勒設(shè)計(jì)了一個(gè)用被免疫的B淋巴細(xì)胞制備單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)，如下圖表示其實(shí)驗(yàn)流程，請(qǐng)回答下列問題：
（1）a是骨髓瘤細(xì)胞，b是雜種細(xì)胞（雜交細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞）；①過程是細(xì)胞融合，②表示在選擇性培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；③過程包括了體外培養(yǎng)和小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)．
（2）制備單克隆抗體時(shí)，選擇B淋巴細(xì)胞的原因是每一種B淋巴細(xì)胞只能分泌一種特異性抗體．
（3）如何判斷經(jīng)過②后的細(xì)胞就是雜交細(xì)胞？經(jīng)過②過程后只有雜交細(xì)胞才能存活．
（4）③過程如在體外培養(yǎng)，則需要的環(huán)境條件是（要求答5項(xiàng)）無菌、無毒、營(yíng)養(yǎng)充足、溫度適宜、pH適宜、充足氧氣、5%的CO₂．
（5）誘導(dǎo)動(dòng)、植物細(xì)胞融合常用的一種化學(xué)誘導(dǎo)劑是聚乙二醇（PEG），植物體細(xì)胞雜交之前還需要用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁，植物體細(xì)胞雜交技術(shù)在一定程度上解決了雜交育種的遠(yuǎn)緣雜交不親和（障礙）問題．

Answer 1

分析 1、單克隆抗體制備流程
（1）對(duì)小鼠注射特定的抗原蛋白，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)；（2）得到相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞；（3）將小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合，再用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選；（4）在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的雜種細(xì)胞才能生長(zhǎng)（這種雜種細(xì)胞的特點(diǎn)是既能迅速大量繁殖又能產(chǎn)生專一的抗體）（5）對(duì)上述雜交瘤細(xì)胞還需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，經(jīng)多次篩選，就可獲得足量的能分泌所需抗體的細(xì)胞；（6）最后，將雜交瘤細(xì)胞在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，這樣，從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中，就可以提取出大量的單克隆抗體．
2、分析題圖：a細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞；b表示誘導(dǎo)細(xì)胞融合雜交瘤細(xì)胞；c表示篩選出的雜交瘤細(xì)胞；①過程是細(xì)胞融合，②表示在選擇性培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，③是對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)．

解答 解：（1）根據(jù)試題分析a是骨髓瘤細(xì)胞，b是雜種細(xì)胞（雜交細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞）；①過程是細(xì)胞融合；②表示在選擇性培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；③是對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，該過程包括了體外培養(yǎng)和小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)．
（2）制備單克隆抗體時(shí)，選擇B淋巴細(xì)胞的原因是每一種B淋巴細(xì)胞只能分泌一種特異性抗體，這樣核骨髓瘤細(xì)胞形成的雜交瘤細(xì)胞具有雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，既能大量增殖又能分泌特異性抗體．
（3）②過程使用特定的選擇性培養(yǎng)基篩選，經(jīng)過②過程后只有雜交細(xì)胞才能存活．
（4）動(dòng)物細(xì)胞在體外培養(yǎng)需要無菌、無毒、營(yíng)養(yǎng)充足、溫度適宜、pH適宜、充足氧氣、5%的CO₂等條件．
（5）誘導(dǎo)動(dòng)、植物細(xì)胞融合常用的一種化學(xué)誘導(dǎo)劑是聚乙二醇（PEG），植物體細(xì)胞雜交之前還需要用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁，植物體細(xì)胞雜交技術(shù)能突破生殖隔離，在一定程度上解決了雜交育種的遠(yuǎn)緣雜交不親和（障礙）問題．
故答案為：
（1）骨髓瘤細(xì)胞  雜種細(xì)胞（雜交細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞）  細(xì)胞融合  選擇性培養(yǎng)基  小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)
（2）每一種B淋巴細(xì)胞只能分泌一種特異性抗體
（3）經(jīng)過②過程后只有雜交細(xì)胞才能存活
（4）無菌、無毒、營(yíng)養(yǎng)充足、溫度適宜、pH適宜、充足氧氣、5%的CO₂
（5）聚乙二醇（PEG）  纖維素酶和果膠酶   遠(yuǎn)緣雜交不親和（障礙）

點(diǎn)評(píng) 本題綜合考查動(dòng)物細(xì)胞工程中常用的技術(shù)手段動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和單克隆抗體的制備．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程中其他技術(shù)手段的基礎(chǔ)，在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中通過在培養(yǎng)液中加入一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液創(chuàng)造無菌、無毒的環(huán)境，在培養(yǎng)液中通入二氧化碳以維持培養(yǎng)液的pH；在單克隆抗體的制備過程中，需要對(duì)小鼠注射抗原以產(chǎn)生相應(yīng)的淋巴細(xì)胞，然后篩選出能夠產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞，最后培養(yǎng)獲得單克隆抗體．