Question

【題目】完成下列題目：

（1）基因工程的核心步驟是_________________________。

（2）PCR擴(kuò)增過程中，延伸階段的實(shí)質(zhì)是在_________________酶的作用下，合成子鏈。

（3）將目的基因?qū)�入大腸桿菌細(xì)胞中，常用_______處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于感受態(tài)。

（4）單克隆抗體可制作診斷盒，用于準(zhǔn)確、快速診斷H7N9病毒感染者，這種診斷運(yùn)用了______________雜交技術(shù)。

（5）受精卵在體外培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)液中除了加水、無機(jī)鹽、維生素、葡萄糖、氨基酸等分泌的營(yíng)養(yǎng)成分外，往往需要特別加入__________，同時(shí)在含5%_______的無菌、恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（6）在胚胎移植前，通過__________技術(shù)可獲得較多胚胎。在胚胎移植過程中，供體、受體動(dòng)物選擇好后，要用激素進(jìn)行_____________處理，使供、受體的生理狀態(tài)相同。

（7）動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)常用的誘導(dǎo)因素有PEG、電激、和___________________，培養(yǎng)液中共有_____種類型的融合細(xì)胞（只考慮兩兩融合）。

Answer 1

【答案】基因表達(dá)載體的構(gòu)建 熱穩(wěn)定DNA聚合（或Taq） Ca2+（或CaCl2） 抗原—抗體 血清 CO2 胚胎分割 同期發(fā)情 滅活的病毒 3

【解析】

1、基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲取的方法有：從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

2、單克隆抗體制備的大致過程是利用特定抗原刺激小鼠產(chǎn)生已免疫的B淋巴細(xì)胞，提取這種B淋巴細(xì)胞與小鼠體內(nèi)提取的具有無限增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合，經(jīng)過不斷篩選，得到既能迅速增殖又能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，再經(jīng)過細(xì)胞培養(yǎng)，制備提純出所需的單克隆抗體。

3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：①無菌、無毒的環(huán)境：消毒、滅菌；添加一定量的抗生素；定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物。②營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：

糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)。③溫度和pH。④氣體環(huán)境：95%空氣和5%的CO2，其中CO2的作用是調(diào)節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)液的pH。

4、細(xì)胞融合技術(shù)突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合時(shí)，常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇、電激和滅活的病毒等。

（1）基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建 。

（2）PCR擴(kuò)增技術(shù)合成子鏈時(shí)用的是熱穩(wěn)定DNA聚合酶（或Taq酶）。

（3）將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞中，常用Ca2+（或CaCl2）處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于感受態(tài)。

（4）特異性抗體與與相應(yīng)抗原具有特異性結(jié)合的特性，利用抗原-抗體雜交技術(shù)可以將單克隆抗體制成診斷盒，用于準(zhǔn)確、快速診斷H7N9病毒感染者。

（5）受精卵在體外培養(yǎng)時(shí)，需要向培養(yǎng)液中添加血清等天然物質(zhì)，同時(shí)在含5%CO2的的無菌、恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（6）胚胎分割是指采用機(jī)械方法將早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，經(jīng)移植獲得同卵雙胎或多胎的技術(shù)。所以在胚胎移植前，通常通過胚胎分割技術(shù)獲得較多的胚胎。在胚胎移植過程中，供體、受體動(dòng)物選擇好后，要用激素進(jìn)行同期發(fā)情處理，使供、受體的生理狀態(tài)相同。

（7）在誘導(dǎo)細(xì)胞融合時(shí)，常用的誘導(dǎo)因素有PEG、電激和滅活病毒，若考慮兩兩融合，則有AA、BB和AB三類細(xì)胞。