Question

【題目】人的S細(xì)胞可以產(chǎn)生某種具有臨床價(jià)值的蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)由基因yie編碼。目前可利用現(xiàn)代生物技術(shù)生產(chǎn)該蛋白質(zhì)�；卮鹣铝袉�(wèn)題：

（1）要獲得yie基因，可從人的S細(xì)胞中提取______作為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下合成互補(bǔ)DNA，再利用_______技術(shù)在體外擴(kuò)增獲得大量yie基因。

（2）通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可將yie基因?qū)�入某種植物的葉肉細(xì)胞中。若該葉肉細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)、篩選等得到了yie基因能穩(wěn)定表達(dá)的愈傷組織，則說(shuō)明yie基因已經(jīng)_____。把愈傷組織放在搖床上，通過(guò)____培養(yǎng)可以獲得單細(xì)胞，這種單細(xì)胞具有_______細(xì)胞的特征，最終可以形成植株。

（3）也可將yie基因通過(guò)__________方法注入植物的原生質(zhì)體。為獲取原生質(zhì)體，需要制備含__________酶以及滲透壓穩(wěn)定劑、細(xì)胞膜保護(hù)劑等的反應(yīng)液。將外植體放入反應(yīng)液后要嚴(yán)格控制好溫度、pH和___________，避免脆弱的原生質(zhì)體受到持續(xù)的傷害。

Answer 1

【答案】mRNA PCR 整合到染色體DNA上 液體懸浮 胚性 顯微注射 纖維素酶和果膠 反應(yīng)時(shí)間

【解析】

（1）逆轉(zhuǎn)錄是在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下，以RNA為模板合成DNA的過(guò)程。利用PCR技術(shù)可以大量擴(kuò)增目的基因。農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。（2）將含有愈傷組織培養(yǎng)物的試管放在搖床上，通過(guò)液體懸浮培養(yǎng)可以分散成單細(xì)胞，這種單細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)豐富、液泡小而細(xì)胞核大，這是胚性細(xì)胞的特征。在適宜的培養(yǎng)基上，這種單細(xì)胞可發(fā)育成胚狀體，胚狀體繼續(xù)發(fā)育，可以形成植株。（3）利用顯微注射法可將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞（包括原生質(zhì)體）中。植物原生質(zhì)體獲得的方法是：在0.5～0.6mol/L的甘露醇溶液環(huán)境（較高滲透壓）下，用纖維素酶和果膠酶混合液處理實(shí)驗(yàn)材料，將細(xì)胞壁消化除去，獲得球形的原生質(zhì)體。

(1) yie基因?qū)儆谀康幕�因，獲取目的基因可以采用逆轉(zhuǎn)錄法，即從相應(yīng)的細(xì)胞中提取mRNA作為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下合成互補(bǔ)DNA。利用PCR技術(shù)可以在生物體外大量擴(kuò)增目的基因。

(2) 農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點(diǎn)，如果將yie基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把yie基因整合到染色體DNA上。把愈傷組織放在搖床上，通過(guò)液體懸浮培養(yǎng)，可以獲得具胚性細(xì)胞特征（細(xì)胞質(zhì)豐富、液泡小而細(xì)胞核大）的單細(xì)胞。

(3) 將yie基因注入植物的原生質(zhì)體中，可以采用顯微注射的方法。用纖維素酶和果膠酶水解植物細(xì)胞的細(xì)胞壁，可以獲得分離的植物細(xì)胞原生質(zhì)體。外植體放入反應(yīng)液后要嚴(yán)格控制好溫度、pH和反應(yīng)時(shí)間，避免脆弱的原生質(zhì)體受到持續(xù)的傷害。