Question

13．如圖1表示某質(zhì)粒，該質(zhì)粒含有抗氨芐青霉素抗性基因（amp）和LacZ基因，LacZ基因能合成β-半乳糖苷酶，該酶能將白色底物X-Gal轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，圖2表示含目的基因的DNA片段，實驗小組利用該質(zhì)粒為載體將目的基因?qū)�入大腸桿菌，并篩選成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞（ScaⅠ、ApaⅠ、EcoRⅠ表示限制酶切割位點）．請回答下列問題：

（1）在構(gòu)建基因表達載體時應(yīng)選用的限制酶是ApaⅠ和EcoRⅠ．
（2）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌時，應(yīng)用CaCl₂處理大腸桿菌，制備感受態(tài)細(xì)胞，實驗室選用微生物作為受體細(xì)胞的優(yōu)點是繁殖速度快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較少．
（3）重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌后，應(yīng)將大腸桿菌置于以X-Gal為底物，并添加氨芐青霉素   的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，挑選出白色（填“白色”或“藍(lán)色”）菌落．
（4）檢測目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞常用的方法是DNA分子雜交技術(shù)，該方法依據(jù)的原理是堿基互補配對．

Answer 1

分析 分析圖解可知，質(zhì)粒中，抗氨芐青霉素抗性基因（amp'）和LacZ基因都屬于標(biāo)記基因，并且目的基因和質(zhì)粒上均存在ScaⅠ、ApaⅠ、EcoRⅠ三種酶的酶切位點．一般為了防止目的基因和質(zhì)粒反向連接，用兩種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒．

解答 解：（1）為了防止目的基因和質(zhì)粒自身連接和反向連接，在構(gòu)建基因表達載體時應(yīng)選用的限制酶ApaⅠ和EcoRⅠ．
（2）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌時，應(yīng)用CaCl₂處理大腸桿菌，制備感受態(tài)細(xì)胞，實驗室選用微生物作為受體細(xì)胞的優(yōu)點是繁殖速度快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較少．
（3）根據(jù)（1）小題可知，在重組質(zhì)粒中，LacZ基因破壞失活，因此重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌后，應(yīng)將大腸桿菌置于以X-Gal為底物，并添加氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，挑選出白色菌落進行選擇培養(yǎng)．
（4）檢測目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞常用的方法是DNA分子雜交技術(shù)，該方法依據(jù)的原理是堿基互補配對．
故答案為：
（1）ApaⅠ和EcoRⅠ
（2）CaCl₂    繁殖速度快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較少
（3）氨芐青霉素   白色
（4）DNA分子雜交技術(shù)   堿基互補配對

點評 本題結(jié)合重組質(zhì)粒形成示意圖，考查基因工程的相關(guān)知識，重點考查基因工程的步驟，要求考生識記基因工程的步驟，掌握重組質(zhì)粒的篩選方法，能運用所學(xué)的知識，結(jié)合題圖，判斷導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌能否在相應(yīng)的培養(yǎng)基中生存．