Question

請(qǐng)分析回答下列有關(guān)現(xiàn)代生物科技方面的問題：
白細(xì)胞介素是一類淋巴因子．研究人員將人白細(xì)胞介素的基因?qū)�入到酵母�?xì)胞中，使其分泌出有活性的人白細(xì)胞介素．
（1）目的基因獲�。簭慕】等梭w外周靜脈血分離得到淋巴細(xì)胞，于37℃培養(yǎng)48h，提取細(xì)胞總RNA，生成cDNA．根據(jù)已知目的基因的核苷酸序列合成引物，通過PCR擴(kuò)增獲取目的基因，此時(shí)需要加入的反應(yīng)物與生成cDNA時(shí)所加反應(yīng)物不同的是

 

．
重組載體的構(gòu)建：用兩種限制酶EcoR1與EcoR52處理載體和目的基因后，用

 

酶處理，形成重組載體．
將重組載體導(dǎo)入酵母細(xì)胞，在培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時(shí)間后，收集菌液離心取

 

（上清液/菌體）進(jìn)行產(chǎn)物鑒定．
（2）如果要想要使牛奶中含有人白細(xì)胞介素，導(dǎo)入目的基因時(shí)常采用的方法是

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：分析題圖：圖示表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，載體和目的基因都有限制酶EcoRⅠ與EcoR52的切割位點(diǎn)，所以切割載體和目的基因時(shí)用限制酶EcoRⅠ與EcoR52，再用DNA連接酶連接目的基因和運(yùn)載體形成重組載體．

解答： 解：（1）以RNA為模板合成cDNA稱為逆轉(zhuǎn)錄（反轉(zhuǎn)錄），該過程需要模板（RNA）、酶（逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶）、原料（脫氧核苷酸）和能量．采用PCR技術(shù)擴(kuò)增獲取目的基因時(shí)需要模板（cDNA）、酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶）、原料（脫氧核苷酸）、引物．因此，根據(jù)已知目的基因的核苷酸序列，合成引物、通過PCR擴(kuò)增獲取目的基因，此時(shí)需要加入的反應(yīng)物與生成cDNA時(shí)所加反應(yīng)物不同的是：模板cDNA、耐高溫（熱穩(wěn)定）DNA聚合酶（Taq酶）、引物．構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需先用兩種限制酶EcoR1與EcoR52處理載體和目的基因后，再用DNA連接酶處理，形成重組載體．將導(dǎo)入重組載體的酵母細(xì)胞培養(yǎng)一段時(shí)間后，收集菌液進(jìn)行離心，應(yīng)取上清液進(jìn)行產(chǎn)物鑒定（白細(xì)胞介素屬于分泌蛋白）．
（2）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞時(shí)常采用顯微注射法．
故答案為：
（1）模板cDNA、耐高溫（熱穩(wěn)定）DNA聚合酶（Taq酶）、引物     DNA連接   上清液
（2）顯微注射法

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合圖解，綜合考查基因工程、PCR技術(shù)等知識(shí)，要求考生識(shí)記記基因工程的工具及操作步驟，掌握各步驟中的相關(guān)細(xì)節(jié)；識(shí)記PCR技術(shù)的原理、條件，能與逆轉(zhuǎn)錄法進(jìn)行比較，再結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．