Question

【題目】請回答下列內(nèi)容：

（1）氨基酸序列分析技術(shù)和DNA序列分析的方法，為基因序列圖的繪制提供了可能。DNA合成儀的問世為___________、探針、小分子量DNA基因的獲得提供了方便。

（2）研究人員用大腸桿菌作生產(chǎn)菌，利用基因工程技術(shù)分別生產(chǎn)胰島素兩條鏈。由A、B兩條肽鏈可推導(dǎo)出A、B基因的堿基序列，依據(jù)是______________________。因?yàn)?/span>A、B基因中的脫氧核苷酸數(shù)量較少，常用___________方法獲取目的基因。

（3）目的基因擴(kuò)增通常采用PCR技術(shù)，一個(gè)DNA在第三次擴(kuò)增需引物對數(shù)為___________。

（4）檢測A、B基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞時(shí)，常用___________作探針。檢測胰島素基因是否表達(dá)常用___________雜交方法。

（5）引導(dǎo)肽是由引導(dǎo)肽基因控制合成的一段多肽序列，若在胰島素的A、B肽鏈的前端加上引導(dǎo)肽序列后，可將A、B肽鏈引導(dǎo)到大腸桿菌的細(xì)胞膜外，便于A、B肽鏈提取。為實(shí)現(xiàn)上述目的，操作是______________________。在以后的體外加工過程中，需要用___________切除引導(dǎo)肽。

Answer 1

【答案】引物??? 氨基酸和密碼子的對應(yīng)關(guān)系和堿基互補(bǔ)配對原則??? 人工合成??? 4??? 放射性標(biāo)記的A、B基因的一條單鏈??? 抗原—抗體??? 將A、B基因連接在引導(dǎo)肽基因后??? 肽酶???

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）DNA合成儀可以用于體外DNA分子小的片段的合成，因此為小分子量的DNA的合成、PCR擴(kuò)增中引物的合成以及基因工程中基因探針的制作提供了方便。

（2）根據(jù)胰島素兩條鏈上的氨基酸序列，利用氨基酸與密碼子的對應(yīng)關(guān)系可以推導(dǎo)出mRNA上的核苷酸序列，進(jìn)而根據(jù)堿基互補(bǔ)配對的關(guān)系推導(dǎo)出合成胰島素A、B兩條肽鏈的A、B基因的堿基序列。因?yàn)?/span>A、B基因中的脫氧核苷酸數(shù)量較少，常用人工合成法合成目的基因。

（3）一個(gè)DNA復(fù)制兩次得到4個(gè)DNA分子，在第三次擴(kuò)增時(shí)需引物對數(shù)為4對。

（4）檢測A、B基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞時(shí)，常用同位素標(biāo)記的目的基因的單鏈作為探針（放射性標(biāo)記的A、B基因的一條單鏈），與從受體細(xì)胞內(nèi)取出的核DNA分子的單鏈進(jìn)行雜交，觀察有無雜交帶的出現(xiàn)。檢測胰島素基因是否表達(dá)出胰島素時(shí)，常用抗原-抗體雜交法判斷。

（5）根據(jù)題意，在胰島素的A、B肽鏈的前端加上引導(dǎo)肽序列后，可將A、B肽鏈引導(dǎo)到大腸桿菌的細(xì)胞膜外，便于A、B肽鏈提取，為了達(dá)到這一目的可以將將A、B基因連接在引導(dǎo)肽基因后構(gòu)建成基因表達(dá)載體，導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)。該胰島素分泌后還需要切除引導(dǎo)肽序列，因此根據(jù)酶的專一性，需要用肽酶切除引導(dǎo)肽。