Question

6．草魚出血病病毒（GCRV）是RNA病毒，易引起草魚出血病，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失．科學家嘗試用GCRV的外殼VP6蛋白基因，利用基因工程的方法制備蛋白疫苗，并通過草魚攻毒實驗檢測免疫保護效果．
（1）下列能夠作為抗原引發(fā)魚體產(chǎn)生特異性免疫的是（多選）CD
A．VP6蛋白基因     B．重組質(zhì)粒   C．GCRV外殼蛋白    D．出血病病毒
（2）GCRV的遺傳物質(zhì)是RNA，因此需要在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下先合成  cDNA，再設計相應的引物，通過PCR技術(shù)獲得大量的VP6基因．用限制酶和DNA連接酶處理VP6基因和質(zhì)粒，構(gòu)建表達載體后導入大腸桿菌，篩選出能成功表達VP6蛋白的大腸桿菌，提取重組VP6蛋白作為蛋白疫苗．
（3）魚體免疫實驗：實驗前2周，選取健壯無病的同一批次、大小相似的草魚魚種置于適宜水溫中飼育．配制一定濃度的重組VP6蛋白，按400μL/尾從背鰭基部肌肉注射入魚體內(nèi)，同時設未免疫的草魚為對照組，每組40尾．草魚注射蛋白疫苗后，按不同免疫時間檢測其體內(nèi)抗體水平，結(jié)果如圖．將重組VP6蛋白注射入草魚體內(nèi)，經(jīng)免疫過程使魚體內(nèi)產(chǎn)生抗體和記憶B細胞，從而起到免疫保護作用．由實驗結(jié)果分析，在不同檢測時間點，草魚血液中的抗體水平均高于對照組，說明純化的重組VP6蛋白具有良好的免疫原性；在第21天草魚體內(nèi)抗體達到高峰，隨后呈下降趨勢，該結(jié)果與體內(nèi)抗體的消長規(guī)律相符．為了進一步檢測免疫效果，草魚注射重組VP6蛋白一段時間后，人工接種GCRV進行攻毒實驗，結(jié)果顯示，攻毒4-7天后，對照組100%發(fā)病死亡，而免疫組未見感染發(fā)�。畬φ战M發(fā)病死亡的魚需經(jīng)解剖分析，以確定死因是GCRV引起的（或排出其他病原體導致的死亡）．上述實驗結(jié)果表明用純化的重組VP6蛋白免疫草魚對出血病具有較好的免疫保護作用．

Answer 1

分析 分析柱形圖：該圖是注射VP6蛋白作為蛋白疫苗，檢測抗體含量的實驗，有實驗結(jié)果可以看出：，在不同檢測時間點，草魚血液中的抗體水平均高于對照組，說明純化的重組VP6蛋白具有良好的免疫原性；在第21草魚體內(nèi)抗體達到高峰，隨后呈下降趨勢．

解答 解：（1）草魚病毒性出血病是由草魚呼腸弧病毒（GCRV）引起的，而GCRV的外殼蛋白是引起草魚患病毒性出血病的抗原物質(zhì)．故注射GCRV外殼蛋白或者出血病病毒都能作為抗原引發(fā)魚體產(chǎn)生特異性免疫．
（2）GCRV的遺傳物質(zhì)是RNA，因此需要在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下先合成cDNA，再設計相應的引物，通過PCR技術(shù)獲得大量的VP6基因．用限制酶和DNA連接酶處理VP6基因和質(zhì)粒，構(gòu)建表達載體后導入大腸桿菌，篩選出能成功表達VP6蛋白的大腸桿菌，提取重組VP6蛋白作為蛋白疫苗．
（3）要通過草魚檢測疫苗的效果，故實驗的自變量是有無注射疫苗-VP6蛋白，故選取健壯無病的同一批次、大小相似的草魚魚種置于適宜水溫中飼育．配制一定濃度的重組VP6蛋白，按400μL/尾從背鰭基部肌肉注射入魚體內(nèi)，同時設未免疫的草魚為對照組，將重組VP6蛋白注射入草魚體內(nèi)，經(jīng)免疫過程使魚體內(nèi)產(chǎn)生抗體和記憶B細胞，由實驗結(jié)果分析，在不同檢測時間點，草魚血液中的抗體水平均高于對照組，說明純化的重組VP6蛋白具有良好的免疫原性；在第21草魚體內(nèi)抗體達到高峰，隨后呈下降趨勢，為了進一步檢測免疫效果，草魚注射重組VP6蛋白一段時間后，人工接種GCRV進行攻毒實驗，攻毒4-7天后，對照組100%發(fā)病死亡，而免疫組未見感染發(fā)�。畬φ战M發(fā)病死亡的魚需經(jīng)解剖分析，以確定死因是GCRV引起的（或排出其他病原體導致的死亡）．
故答案為：
（1）C D 
（2）逆轉(zhuǎn)錄    PCR   限制酶和DNA連接 
（3）未免疫的草魚   記憶B細胞    高于 21   GCRV 死因是GCRV引起的（或排出其他病原體導致的死亡）

點評 本題考查了免疫相關的知識，意在考查考生分析實驗目的，分析實驗結(jié)果，獲取實驗結(jié)論的能力，難度適中，對于免疫過程及免疫預防的理解是解題的關鍵．