Question

1．在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)一種廣泛使用的除草劑（含氮有機化合物）在土壤中不易降解，長期使用可污染土壤．為修復被該除草劑污染的土壤，可按下面程序選育能降解該除草劑的細菌（已知該除草劑在水中溶解度低，含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明）．

（1）制備土壤浸出液時，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進行稀釋處理．
（2）要從長期使用該除草劑的土壤中分離目的菌，從用途方面來看，上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點是以該除草劑為唯一氮源．
（3）在劃線培養(yǎng)時，只有很少菌落出現(xiàn)，大部分細菌在此培養(yǎng)基上不能生長的主要原因是培養(yǎng)基中缺少這些細菌可利用的氮源或有氧條件抑制了這些細菌的生長．
（4）在固體培養(yǎng)基上形成的菌落中，無透明帶菌落利用的氮源主要是氮氣，有透明帶菌落利用的氮源主要是該除草劑，據(jù)此可篩選出目的菌．
（5）科研人員用放射線處理該細菌獲得兩個突變株A和B，然后對突變株A和B進行實驗，結果如表所示：

接種的菌種	一般培養(yǎng)基	實驗處理及結果
A	不生長	添加營養(yǎng)物質(zhì)甲，能生長
B	不生長	添加營養(yǎng)物質(zhì)乙，能生長
A+B	能生長	不添加營養(yǎng)物質(zhì)甲、乙就能生長

突變株A不能在一般培養(yǎng)基上生長的原因是突變株A缺乏合成營養(yǎng)物質(zhì)甲所需要的酶　突變株A生長需要營養(yǎng)物質(zhì)甲，突變株B可以提供．突變株A和B混合在一起接種于一般培養(yǎng)基中能生長的最可能原因是突變株B生長需要營養(yǎng)物質(zhì)乙，突變株A可以提供．

Answer 1

分析 1、從土壤中篩選分離目的微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株．篩選能降解該除草劑的細菌需要以該除草劑為唯一的氮源的選擇培養(yǎng)基．
2、圖示是篩選分離能降解該除草劑的細菌的過程，所用的接種方法是平板劃線法．

解答 解：（1）制備土壤浸出液時，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進行稀釋處理．
（2）據(jù)圖分析，B的操作是平板劃線，該培養(yǎng)基應該為選擇培養(yǎng)基，即是以該除草劑為唯一氮源（在無氮培養(yǎng)基中添加該除草劑）．
（3）選擇培養(yǎng)基中缺少大部分細菌可利用的氮源（多數(shù)細菌不能以該除草劑為氮源），所以在劃線培養(yǎng)時，只有很少菌落出現(xiàn)，大部分細菌在此培養(yǎng)基上不能生長．
（4）由于該除草劑的培養(yǎng)基不透明，被菌落分解后可產(chǎn)生透明帶，無透明帶說明除草劑未被分解，菌落利用的氮源就只能是空氣中的氮氣了；而出現(xiàn)透明帶說明除草劑被分解，菌落是分解該除草劑的細菌，氮源是該除草劑．
（5）突變株A的生長依賴于營養(yǎng)物質(zhì)甲，突變株B的生長依賴于營養(yǎng)物質(zhì)乙．不添加營養(yǎng)物質(zhì)甲和乙，二者混合培養(yǎng)時都能生長，最可能的原因是突變株A為突變株B提供了營養(yǎng)物質(zhì)乙，突變株B為突變株A提供了營養(yǎng)物質(zhì)甲．
故答案為：
（1）稀釋　
（2）以該除草劑為唯一氮源
（3）培養(yǎng)基中缺少這些細菌可利用的氮源　
（4）氮氣　該除草劑　
（5）突變株A缺乏合成營養(yǎng)物質(zhì)甲所需要的酶　突變株A生長需要營養(yǎng)物質(zhì)甲，突變株B可以提供；突變株B生長需要營養(yǎng)物質(zhì)乙，突變株A可以提供

點評 本題考查了微生物分離與培養(yǎng)的有關知識，解答此類題目的關鍵是對土壤中微生物的分離這個實驗的熟練掌握，和在微生物實驗中的無菌操作相關知識的熟練應用．