Question

【題目】Ⅰ．為了分離和純化高效分解石油的細(xì)菌，科研人員利用被石油污染過的土壤進(jìn)行了如圖A 所示的實(shí)驗(yàn)。

（1）同學(xué)甲進(jìn)行步驟④的操作，其中一個平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖B所示。該同學(xué)的接種方法是_________，出現(xiàn)圖B結(jié)果可能的失誤操作是____________。純化菌株時，還可釆用平板劃線法。劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌，第二劃線區(qū)域的第一條線上無菌落，其它劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有____________。

（2）同學(xué)乙也按照同學(xué)甲的接種方法進(jìn)行了步驟④的操作：將lmL樣品稀釋100倍，在3 個平板上分別接入0．lmL稀釋液；培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為56、58和57。據(jù)此可得出每升樣品中的活菌數(shù)為____________個。

Ⅱ．貴州知名品牌“老干媽”系列產(chǎn)品一直沿用傳統(tǒng)工藝精心釀造，其中風(fēng)味豆豉深受大眾喜愛，遠(yuǎn)銷國內(nèi)外。風(fēng)味豆豉的主要工藝流程是：黃豆→洗凈浸泡→煮熟→加適量鹽→發(fā)酵→加入配料→裝壇密封→成品。請回答下列問題：

（3）制作豆豉前期發(fā)酵的目的是讓霉菌產(chǎn)生相應(yīng)的酶，如蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)樾》肿与暮桶被�酸，脂肪轉(zhuǎn)變?yōu)?/span>______________，使豆豉營養(yǎng)更加豐富，有利于健康。發(fā)酵過程中需采用人工培養(yǎng)純凈菌種，接種前隨機(jī)選取若干滅菌后的平板，先培養(yǎng)一段時間目的是_______________________________________。

（4）豆豉制成成品后，需測定其亞硝酸鹽含量，原理是在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與_____________發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成_____________色染料。

Answer 1

【答案】稀釋涂布平板法 涂布不均勻 接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開始 5．7×107 脂肪酸和甘油 檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格（或檢測培養(yǎng)基是否被雜菌污染） 對氨基苯磺酸 玫瑰紅

【解析】

1、微生物常見的接種的方法：

①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。

2、分析圖B：圖B采用的是稀釋涂布平板法，但涂布不均勻。

3、參與腐乳制作的微生物主要是毛霉，其新陳代謝類型是異養(yǎng)需氧型。腐乳制作的原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪分解成甘油和脂肪酸。

4、測定亞硝酸鹽含量的原理：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液目測比較，估算泡菜中亞硝酸鹽含量。

（1）圖B中菌落比較分散，其接種方法是稀釋涂布平板法；而菌落分布均勻可能的原因是涂布不均勻；造成劃線無菌落可能的操作失誤有接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開始。

（2）利用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)的公式：個/升。

（3）霉菌可以產(chǎn)生脂肪酶使脂肪變?yōu)楦视秃椭�肪酸；發(fā)酵過程中需采用人工培養(yǎng)純凈菌種，接種前隨機(jī)選取若干滅菌后的平板，先培養(yǎng)一段時間以檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格。

（4）在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料。