Question

煙草花葉病毒(TMV)是一種在煙草及蔬菜等經(jīng)濟作物中廣泛傳播的病毒，對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成很大的危害。研究者利用植物基因工程的方法將煙草花葉病毒外殼蛋白基因(CP基因)導入煙草并在轉(zhuǎn)化的煙草植株中表達，使其獲得對煙草花葉病毒的抗性。下圖是轉(zhuǎn)化煙草植株的培育流程，請回答：

(1)含有CP基因的cDNA文庫是通過將TMV的RNA進行 獲得的。在對cDNA進行PCR擴增時，設計的引物自身不能含有 序列。

(2)將CP基因?qū)�入土壤農(nóng)桿菌質(zhì)粒的 ，其原因是 __________________

_________________________________________________________________ 。

(3)含重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌與煙草葉共培養(yǎng)過程中，對煙草葉的處理要求是 ________________________________________。

(4)用含重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌感染煙草葉成功后，共培養(yǎng)形成愈傷組織時的培養(yǎng)條件是必須 。

(5)在誘導芽、根的培養(yǎng)基中需添加 才能進行篩選，并要注意在不同的培養(yǎng)階段需調(diào)整 的比例。

 

Answer 1

(1)反轉(zhuǎn)錄 互補

(2)T-DNA區(qū) T-DNA可以從農(nóng)桿菌中轉(zhuǎn)移并穩(wěn)定整合到植物染色體的DNA中

(3)無菌，并切成小片

(4)遮光

(5)卡那霉素和氨芐青霉素 生長素和細胞分裂素

【解析】(1)cDNA文庫是通過反轉(zhuǎn)錄獲得的，引物自身不能含有互補序列。(2)CP基因可導入土壤農(nóng)桿菌質(zhì)粒的T-DNA區(qū)，因為T-DNA可以從農(nóng)桿菌中轉(zhuǎn)移并穩(wěn)定整合到植物染色體的DNA中。 (3)在植物組織培養(yǎng)過程中，有時需對外植體進行無菌處理并切成小片，以增加組織細胞對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收速度。(4)誘導形成愈傷組織時必須遮光，防止出現(xiàn)再分化。(5)重組質(zhì)粒具有卡那霉素抗性基因和氨芐青霉素抗性基因，所以需要在培養(yǎng)基中添加卡那霉素和氨芐青霉素進行篩選。同時，植物組織培養(yǎng)過程中要注意在不同培養(yǎng)階段調(diào)整生長素和細胞分裂素的比例，以供植物不同發(fā)育時期的需要。