Question

13．中國科學家利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了高品質(zhì)的奶牛，其牛奶中含有人的干擾素，這種物質(zhì)有利于增強人體免疫能力，請回答與轉(zhuǎn)基因奶牛培育過程相關的問題．
（1）一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列，大多數(shù)限制酶的識別序列由6個核苷酸組成，當限制酶在它識別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA的兩條鏈分別切開時，產(chǎn)生的是黏性末端．
（2）若要使獲得的轉(zhuǎn)基因牛分泌的乳汁中含有人的干擾素，則所構(gòu)建的基因表達載體必須包括：某種牛奶腺分泌蛋白基因的啟動子，人干擾素基因，終止子，標記基因和復制原點等，目前常用的措施是將該基因表達載體導入牛的受精卵（填“受精卵”或“乳腺細胞”），導入方法是顯微注射技術(shù)
（3）將獲得的重組細胞在體外進行培養(yǎng)，培養(yǎng)液中通常需要加入血清、血漿等一些天然成分，培養(yǎng)皿要置于含95%空氣加5%CO₂的混合氣體的培養(yǎng)箱中，CO₂的作用是維持培養(yǎng)液的pH
（4）通常用激素處理代孕奶牛和供體奶牛，使其生理條件達到同步，稱為同期發(fā)情處理，配種或人工受精后，用特殊的裝置將供體母牛子宮的胚胎沖洗出來，稱為沖卵
（5）早期胚胎發(fā)育至桑椹胚或囊胚階段即可移植，移入子宮的外來胚胎能在受體存活的生理學基礎是不發(fā)生免疫排斥
（6）該技術(shù)的弊端是獲取的轉(zhuǎn)基因牛奶必須為雌性，因此我們需要取囊胚期的滋養(yǎng)層細胞進行性別鑒定．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）大多數(shù)限制酶的識別序列由6個核苷酸組成．DNA分子經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式，即黏性末端和平末端，當限制酶在它識別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA的兩條鏈分別切開時，產(chǎn)生的是黏性末端．
（2）基因表達載體必須包括：某種牛乳腺分泌蛋白基因及其啟動子、人干擾素基因（或目的基因）、終止子、標記基因和復制原點等．培育轉(zhuǎn)基因動物時，常以受精卵為受體細胞，且將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法．
（3）重組細胞培養(yǎng)時通常要加入血清（或血漿）等天然成分；在細胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，防止培養(yǎng)過程中雜菌污染．培養(yǎng)過程中通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于含95%空氣加5%CO₂的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，其中95%空氣是細胞代謝必需的，5%的CO₂維持培養(yǎng)液的PH值．
（4）通常用激素處理代孕母奶牛和供體母奶牛，對他們進行同期發(fā)情處理．配種或人工授精后，用特殊的裝置把供體母奶牛子宮內(nèi)的胚胎沖洗出來，即為沖卵．
（5）早期胚胎發(fā)育至桑椹胚或囊胚階段即可移植，移入子宮的外來胚胎能在受體存活的生理學基礎是不發(fā)生免疫排斥
（6）該技術(shù)的弊端是獲取的轉(zhuǎn)基因牛必須為雌性，因此我們需要取囊胚期的滋養(yǎng)層細胞進行性別鑒定．
故答案為：
（1）6  黏性
（2）人干擾素基因  受精卵  顯微注射技術(shù)
（3）血清、血漿  維持培養(yǎng)液的pH
（4）同期發(fā)情  沖卵
（5）桑椹胚或囊胚  不發(fā)生免疫排斥
（6）雌  囊胚  滋養(yǎng)層

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生基因工程的操作工具和操作步驟，掌握各步驟中的相關細節(jié)，能結(jié)合所學的知識準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．