Question

6．血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是目前發(fā)現(xiàn)的誘導(dǎo)腫瘤血管生成的最強烈的血鋅生成因子，針對VEGF生產(chǎn)的抗腫瘤藥物，是治療癌癥的一個方向．經(jīng)研究和開發(fā)，現(xiàn)可利用轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)相關(guān)抗VEGF的單克隆抗體．請回答下列相關(guān)問題：
（1）轉(zhuǎn)基因生物培育的首要條件是先獲得目的基因，常用PCR技術(shù)在體外大量擴增；構(gòu)建基因表達載體時需要的工具酶有限制酶和DNA連接酶，基因表達載體中標記基因的作用是鑒別和篩選含有目的基因的受體細胞．
（2）在轉(zhuǎn)基因動物的培育過程中，將目的基因?qū)�入受精卵常采用的方法是顯微注射技術(shù)，體外培養(yǎng)受精卵時，培養(yǎng)液中提供CO₂的目的是維持培養(yǎng)液的pH．若將培養(yǎng)到囊胚期的胚胎進行分割，其操作過程中特別需要注意的問題是將內(nèi)細胞團均等分割．
（3）單克隆抗體最主要的優(yōu)點是特異性強，靈敏度高，并可大量制備；抗VEGF的單克隆抗體能定向攻擊VEGF，利用的原理是抗原與抗體特異性結(jié)合．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、單克隆抗體的優(yōu)點：特異性強、靈敏度高，并可能大量制備．
3、進行胚胎分割時，應(yīng)選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚，對囊胚階段的胚胎進行分割時要注意將內(nèi)細胞團均等分割，否則會影響分割后胚胎的恢復(fù)和進一步發(fā)育．

解答 解：（1）PCR技術(shù)可在體外大量擴增目的基因；構(gòu)建基因表達載體時，首先要用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，其次還需要用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA分子；基因表達載體中標記基因的作用是鑒別和篩選含有目的基因的受體細胞．
（2）將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；體外培養(yǎng)受精卵時，培養(yǎng)液中提供CO₂的目的是維持培養(yǎng)液的pH．若將培養(yǎng)到囊胚期的胚胎進行分割，其操作過程中特別需要注意的問題是將內(nèi)細胞團均等分割．
（3）單克隆抗體最主要的優(yōu)點是特異性強，靈敏度高，并可大量制備；抗VEGF的單克隆抗體能定向攻擊VEGF，利用的原理是抗原與抗體特異性結(jié)合．
故答案為：
（1）PCR     限制酶和DNA連接酶      鑒別和篩選含有目的基因的受體細胞
（2）顯微注射技術(shù)     維持培養(yǎng)液的pH        將內(nèi)細胞團均等分割
（3）特異性強，靈敏度高，并可大量制備        抗原與抗體特異性結(jié)合

點評 本題考查基因工程、細胞工程和胚胎工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的操作工具及操作步驟；識記單克隆抗體的優(yōu)點；識記胚胎分割的特點及意義，能結(jié)合所學的知識準確答題．