Question

19．埃博拉病毒（EBO）雖纖維狀，EBO衣殼外有包膜，包膜上有5種蛋白棘突（VP系列蛋白和GP蛋白），其中GP蛋白最為關(guān)鍵，能被宿主細(xì)胞強(qiáng)烈識(shí)別．請(qǐng)回答下列問題：
（1）基因疫苗指的是DNA疫苗，要獲得編碼GP蛋白抗原的基因疫苗，首先要提取出病原體的RNA，并將RNA逆轉(zhuǎn)錄合成DNA．要大量獲得表達(dá)特異抗原的基因，可采用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增．
（2）以GP蛋白作為疫苗比利用毒性減弱的埃博拉病毒作疫苗更安全，其原因是GP蛋白自身沒有感染能力．為了從牛分泌的乳汁中生產(chǎn)GP蛋白，在基因?qū)�入牛受體細(xì)胞前，基因的首段必須含有使其僅能在牛的乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的（乳腺蛋白基因的）啟動(dòng)子，才能驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過程．
（3）為了提高胚胎的利用率，可采用胚胎分割技術(shù)．進(jìn)行胚胎分割時(shí)，應(yīng)選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的囊胚或桑椹胚進(jìn)行操作．在對(duì)囊胚階段的胚胎進(jìn)行分割時(shí)，要注意將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割．轉(zhuǎn)基因牛是否培育成功，可以通過抗原-抗體雜交技術(shù)從分子水平進(jìn)行檢測(cè)．
（4）科研人員利用經(jīng)EBO免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞與鼠的瘤細(xì)胞進(jìn)行融合成雜交瘤細(xì)胞，培養(yǎng)后可以獲得純凈的單一品種抗體，其特點(diǎn)是特異性強(qiáng)、靈敏度高、并可能大量制備，可以用此抗體與藥物制成“生物導(dǎo)彈”，抗擊EBO．

Answer 1

分析 1、基因工程至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體．基因表達(dá)載體的組成包括：目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞的方法是顯微注射法．檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物目的基因是否表達(dá)--抗原-抗體雜交技術(shù)．
2、單克隆抗體的制備流程：人工誘導(dǎo)經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，再經(jīng)篩選獲得能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞，通過培養(yǎng)獲得的雜交瘤細(xì)胞得到單克隆抗體．

解答 解：（1）RNA在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下，逆轉(zhuǎn)錄成相應(yīng)的DNA．要大量獲得表達(dá)特異抗原的基因，可采用PCR擴(kuò)增方法，體外大量增殖．
（2）以GP蛋白作為疫苗比基因疫苗更安全，其原因是GP蛋白自身沒有感染能力，但保留有抗原性．為了從牛分泌的乳汁中生產(chǎn)GP蛋白，在基因?qū)�入牛受體細(xì)胞前，基因的首段必須含有使其僅能在牛的乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的（乳腺蛋白基因的）啟動(dòng)子，才能驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過程．
（3）進(jìn)行胚胎分割時(shí)，應(yīng)選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的囊胚或桑椹胚進(jìn)行操作．在對(duì)囊胚階段的胚胎進(jìn)行分割時(shí)，要注意將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割．轉(zhuǎn)基因牛是否培育成功，可以通過抗原-抗體雜交技術(shù)從分子水平進(jìn)行檢測(cè)．
（4）科研人員利用經(jīng)EBO免疫后小鼠的B淋巴（效應(yīng)B或漿）細(xì)胞與鼠的瘤細(xì)胞進(jìn)行雜交，篩選后進(jìn)一歩培養(yǎng)的是雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞既能產(chǎn)生單一抗體，又能在體外快速增殖．可以用雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體與藥物制成“生物導(dǎo)彈”，抗擊埃博拉病毒．
故答案為：
（1）逆轉(zhuǎn)錄合成DNA
（2）GP蛋白自身沒有感染能力     （乳腺蛋白基因的）啟動(dòng)子
（3）桑椹胚   內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割    抗原-抗體雜交
（4）B淋巴細(xì)胞    特異性強(qiáng)、靈敏度高、并可能大量制備

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程和細(xì)胞工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作工具、操作步驟，掌握各步驟的相關(guān)細(xì)節(jié)；識(shí)記單克隆抗體的制備過程，能結(jié)合所學(xué)知識(shí)和題中信息準(zhǔn)確答題，綜合性較強(qiáng)，有一定難度．