Question

13．轉(zhuǎn)基因豬在異種器官移植、生物反應(yīng)器和疾病模型等方面有廣泛應(yīng)用．下圖為轉(zhuǎn)基因豬的培育過(guò)程，請(qǐng)分析回答：

（1）體外培養(yǎng)豬胎兒成纖維細(xì)胞，需定期更換培養(yǎng)液，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成傷害．當(dāng)細(xì)胞貼滿瓶壁時(shí)，可分瓶進(jìn)行傳代培養(yǎng)，讓其繼續(xù)增殖．通常選用10代以內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行核移植，目的是保持細(xì)胞正常的二倍體核型．
（2）為便于檢測(cè)與篩選，用紅色熒光蛋白基因作為標(biāo)記基因參與構(gòu)建基因表達(dá)載體，將其導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞中，篩選發(fā)紅色熒光的細(xì)胞與MⅡ中期的去核卵母細(xì)胞融合，使供體核進(jìn)入受體卵母細(xì)胞，利用物理或化學(xué)的方法激活重組細(xì)胞，使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程形成重組胚胎．采用機(jī)械方法進(jìn)行胚胎分割使代孕豬產(chǎn)下同卵雙胎或多胎．
（3）與成年動(dòng)物細(xì)胞相比，用胚胎細(xì)胞克隆動(dòng)物的成功率較高，原因是胚胎細(xì)胞的分化程度低于成年動(dòng)物的體細(xì)胞，恢復(fù)其全能性相對(duì)容易．

Answer 1

分析 1、分析題圖：圖示表示綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過(guò)程，其中涉及①將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的過(guò)程；②卵母細(xì)胞的采集；③核移植過(guò)程；④早期胚胎培養(yǎng)過(guò)程；⑤胚胎移植．
2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程：取動(dòng)物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞用酶分散為單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)．
3、動(dòng)物核移植是指將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入一個(gè)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎．在體外將采集到的卵母細(xì)胞培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期才成熟，可以通過(guò)顯微操作技術(shù)去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核和第一極體，核移植時(shí)，對(duì)提供細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的奶牛不需要進(jìn)行同期發(fā)情處理，使用電脈沖等方法可以激活重組細(xì)胞使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育．

解答 解：（1）體外動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，需要定期更換培養(yǎng)液，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成傷害．因?yàn)榧?xì)胞具有接觸抑制現(xiàn)象，當(dāng)細(xì)胞貼滿瓶壁時(shí)，可分瓶進(jìn)行傳代培養(yǎng)，讓其繼續(xù)增殖．通常選用10代以內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行核移植，目的是保持細(xì)胞正常的二倍體核型．
（2）為便于檢測(cè)與篩選，用紅色熒光蛋白基因作為標(biāo)記基因參與構(gòu)建基因表達(dá)載體，將其導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞中，核移植中做受體的一般是處于減數(shù)第二次分裂中期的卵母細(xì)胞，故篩選發(fā)紅色熒光的細(xì)胞與MⅡ中期的去核卵母細(xì)胞融合，使供體核進(jìn)入受體卵母細(xì)胞，利用物理或化學(xué)的方法激活重組細(xì)胞，使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程形成重組胚胎．采用機(jī)械方法進(jìn)行胚胎分割使代孕豬產(chǎn)下同卵雙胎或多胎．
（3）與成年動(dòng)物細(xì)胞相比，用胚胎細(xì)胞克隆動(dòng)物的成功率較高，原因是胚胎細(xì)胞的分化程度低于成年動(dòng)物的體細(xì)胞，恢復(fù)其全能性相對(duì)容易．
故答案為：
（1）細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累    傳代    二倍體核型
（2）標(biāo)記    MⅡ中      細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程    胚胎分割
（3）胚胎細(xì)胞的分化程度低于成年動(dòng)物的體細(xì)胞，恢復(fù)其全能性相對(duì)容易

點(diǎn)評(píng) 本題考查了動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件及動(dòng)物的基因工程和胚胎工程，屬于中檔題．