Question

5．R一7是家蠶體內(nèi)的一種小分子非編碼RNA，可與某些mRNA尾端的一段非編碼序列（3′-UTR）結合，進而影響基因的表達．為研究R一7是否影響家蠶基因B（調(diào)控家蠶眼睛發(fā)育）的表達，科研人員將基因B中對應3′一UTR的刀NA片段與熒光素酶基因（R一7不影響熒光素酶基因的表達）重組后導入家蠶胚胎細胞觀察其表達結果．請回答：
（l）利用PCR技術擴增基因B對應3′一UTR的DNA片段，應先依據(jù)該基因的一段核甘酸序列合成引物．
（2）利用限制酶（或限制性核酸內(nèi)切酶）和DNA連接酶可將上述DNA片段插入熒光素酶基因表達載體（如圖1）上的位點2，構建重組載體．
（3）將重組載體與R一7共同導入家蠶胚胎細胞，同時應設置兩個對照組，即將熒光素酶基因表達載體、重組載體分別導入兩組家蠶胚胎細胞．
（4）科研人員分別從實驗組和對照組細胞中提取蛋白質(zhì)，經(jīng)處理檢測后獲得相對熒光值（在適宜條件下，熒光素酶可催化熒光素發(fā)生氧化反應并發(fā)出熒光），其結果如圖2．
（5）依據(jù)實驗結果可推斷，R一7影響基因B的表達，即通過遵循堿基互補配對原則，R一7與基因B所轉(zhuǎn)錄的mRNA的3’一uTR結合，進而抑制（填“促進”或“抑制”）基因B的表達．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（l）利用PCR技術擴增基因B對應3′一UTR的DNA片段，應先依據(jù)該基因的一段核甘酸序列合成引物．
（2）構建基因表達載體時，首先需要用限制酶切割運載體和含有目的基因的外源DNA分子，其次需要用DNA連接酶將目的基因和運載體連接形成重組DNA分子；目的基因插入的位置應該在啟動子和終止子之間，且不能破壞熒光素基因，因此可將上述DNA片段插入熒光素酶基因表達載體上的位點2，構建重組載體．
（3）將重組載體與R一7共同導入家蠶胚胎細胞，同時應設置兩個對照組，即將熒光素酶基因表達載體、重組載體分別導入兩組家蠶胚胎細胞．
（4）基因表達產(chǎn)物是蛋白質(zhì)．
（5）基因表達是指基因控制蛋白質(zhì)的合成，包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個步驟．R一7影響基因B的表達，即通過遵循堿基互補配對原則，R一7與基因B所轉(zhuǎn)錄的mRNA的3’一uTR結合，使基因B表達的翻譯過程失去模板，因此R一7抑制基因B的表達．
故答案為：
（1）引物
（2）限制酶（或限制性核酸內(nèi)切酶）和DNA連接酶    2 
（3）熒光素酶基因表達載體   重組載體
（4）蛋白質(zhì) 
（5）堿基互補配對   抑制

點評 本題結合圖解，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握基因工程技術的相關應用，能結合圖中信息準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．