Question

綠色熒光蛋白基因（GFP）被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，一直作為一個(gè)監(jiān)測(cè)完整細(xì)胞和組織內(nèi)基因表達(dá)及蛋白質(zhì)位置的理想標(biāo)記．請(qǐng)根據(jù)圖表回答下列問(wèn)題．

（1）若圖中GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是-TCGA-，N端伸出的核苷酸的堿基序列是-TGCA-，則在構(gòu)建含該GFP的重組質(zhì)粒A時(shí)，應(yīng)選用限制酶

 

和

 

，再對(duì)

 

進(jìn)行切割．
（2）若對(duì)符合設(shè)計(jì)要求的重組質(zhì)粒A進(jìn)行酶切，假設(shè)所用的酶均可將識(shí)別位點(diǎn)完全切開(kāi)，請(qǐng)根據(jù)圖表中的信息分析，若采用BamHⅠ和PstⅠ酶切，可得到

 

種DNA片段．
（3）檢測(cè)GFP是否已重組到豬胎兒成纖維細(xì)胞的染色體DNA上，可在熒光顯微鏡下觀察GFP的表達(dá)，圖中綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的轉(zhuǎn)基因操作中的GFP既是

 

，也是

 

．
（4）過(guò)程④將重組質(zhì)粒A導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞時(shí)，采用最多也最有效的方法是

 

．
（5）綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過(guò)程中涉及到多項(xiàng)現(xiàn)代生物技術(shù)，圖中⑤⑥⑦過(guò)程屬于

 

．⑧過(guò)程屬于

 

，在使用合成培養(yǎng)基時(shí)，通常加入

 

等一些天然成分．
（6）目前科學(xué)家們通過(guò)蛋白質(zhì)工程制造出了藍(lán)色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍(lán)色熒光蛋白過(guò)程的正確順序是：

 

（用數(shù)字序號(hào)表示）．
①推測(cè)藍(lán)色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸；
②藍(lán)色熒光蛋白的功能分析和結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)序列；
③藍(lán)色熒光蛋白基因的修飾（合成）；
④表達(dá)出藍(lán)色熒光蛋白．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)過(guò)程

專題：

分析：據(jù)圖分析，①表示獲取目的基因，②表示用限制酶切割質(zhì)粒，③表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，④表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，⑤表示將豬胎兒成纖維細(xì)胞提取細(xì)胞核，⑥表示將豬卵母細(xì)胞去除細(xì)胞核，⑦表示核移植，⑧表示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，⑨表示胚胎移植．

解答： 解：（1）從圖示可知，GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是TTCGA，是限制酶HindⅢ酶的切割位點(diǎn)；N端伸出的核苷酸的堿基序列是CTGCA，是限制酶PstⅠ切割位點(diǎn)；則在構(gòu)建含該GFP的重組質(zhì)粒A時(shí)，應(yīng)選用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割目的基因和質(zhì)粒，再用DNA連接酶把目的基因和運(yùn)載體相連．
（2）PstI可將重組質(zhì)粒的N端切開(kāi)，而B(niǎo)amHⅠ能在重組質(zhì)粒的黑色部分切開(kāi)，這樣就得到2種DNA．
（3）據(jù)圖解，可知最終要得到綠色熒光豬，因此GFP是目的基因，由于GFP能合成綠色熒光蛋白，可據(jù)此檢測(cè)GFP是否成功導(dǎo)入細(xì)胞，作為標(biāo)記基因．
（4）將重組質(zhì)粒A導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞時(shí)，采用顯微注射法．
（5）綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過(guò)程中涉及到基因工程、核移植和胚胎移植，圖中⑤⑥⑦過(guò)程屬于核移植技術(shù)．．⑧過(guò)程屬于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，在使用合成培養(yǎng)基時(shí)，通常加入血清、血漿 等一些天然成分．
（6）蛋白質(zhì)工程的基本途徑是：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)（②）→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列（①）→相應(yīng)基因的修飾改造或人工合成（③）→相應(yīng)的表達(dá)（④）．
故答案為：
（1）HindⅢPstⅠTi質(zhì)粒   
（2）2   
（3）目的基因   標(biāo)記基因   
（4）顯微注射技術(shù)   
（5）核移植   動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)   血清、血漿   
（6）②①③④

點(diǎn)評(píng)：本題考查基因工程、蛋白質(zhì)工程、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)等的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生識(shí)圖和理解能力，屬于中檔題．