Question

某生物興趣小組在學(xué)習(xí)了DNA的粗提取和鑒定實(shí)驗(yàn)后，嘗試開(kāi)展RNA的粗提取和鑒定實(shí)驗(yàn)．通過(guò)查閱資料，制訂了以下的實(shí)驗(yàn)方案：
實(shí)驗(yàn)課題：酵母RNA的提取和鑒定
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?．從酵母中提取RNA；2．鑒定RNA．
實(shí)驗(yàn)原理：微生物是工業(yè)上大量生產(chǎn)RNA的原料，其中以酵母尤為理想，因?yàn)榻湍负怂嶂兄饕�是RNA，DNA很少，菌體易收集，RNA易分離．RNA不溶于乙醇和無(wú)水乙醚．利用稀堿法（稀堿能使細(xì)胞壁溶解）或高鹽法（高濃度的鹽改變細(xì)胞膜的通透性）來(lái)釋放RNA．RNA水解液（加硫酸、加熱）+苔黑酚-FeCl₃試劑加熱直到沸騰1分鐘，會(huì)呈現(xiàn)墨綠色．
實(shí)驗(yàn)材料：干酵母粉、離心機(jī)、燒杯、試管、玻璃棒等；0.2%氫氧化鈉、95%乙醇、無(wú)水乙醚、乙酸、10%硫酸溶液、苔黑酚-FeCl₃試劑等．
實(shí)驗(yàn)步驟：
①稱6克干酵母
②加0.2%氫氧化鈉45mL，沸水加熱20分鐘，攪拌，后加乙酸7滴
③離心10分鐘后取上清液
④邊攪拌邊緩慢加95%乙醇并靜置10分鐘
⑤離心后先用95%乙醇洗兩次，再用無(wú)水乙醚洗兩次
⑥獲得RNA粗制品
⑦RNA鑒定
請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案，思考并回答下列問(wèn)題：
（1）酵母菌細(xì)胞中含有RNA的結(jié)構(gòu)有

 

．酵母菌也是便于用來(lái)研究細(xì)胞呼吸不同方式的好材料，理由是

 

．
（2）實(shí)驗(yàn)步驟⑤中，離心后取

 

用乙醇、無(wú)水乙醚進(jìn)行洗滌．
（3）RNA提取過(guò)程要注意溫度的控制，在20～70℃的溫度范圍內(nèi)停留的時(shí)間不能太長(zhǎng)，其原因是

 

，
（4）稀堿法提取RNA須在沸水浴中進(jìn)行的目的，一是

 

，二是

 

，以便獲得更多更純凈的RNA．
（5）若用花椰菜來(lái)提取DNA，可用

 

瓦解細(xì)胞膜，然后充分研磨，實(shí)驗(yàn)中研磨速度要

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：DNA的粗提取和鑒定

專題：

分析：1、酵母核酸中主要是RNA，DNA很少，菌體易收集，RNA易分離．
2、RNA不溶于乙醇和無(wú)水乙醚．
3、利用稀堿法（稀堿能使細(xì)胞壁溶解）或高鹽法（高濃度的鹽改變細(xì)胞膜的通透性）來(lái)釋放RNA．
4、RNA水解液（加硫酸、加熱）+苔黑酚-FeCl₃試劑加熱直到沸騰1分鐘，會(huì)呈現(xiàn)墨綠色．

解答： 解：（1）酵母菌中含有RNA的結(jié)構(gòu)有細(xì)胞核、核糖體（蛋白質(zhì)和RNA構(gòu)成）、線粒體、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)（RNA主要存在于細(xì)胞質(zhì)中）．酵母菌在有氧和無(wú)氧條件下都能生存，屬于兼性厭氧型，所以是用來(lái)研究細(xì)胞呼吸不同方式的好材料．
（2）因?yàn)镽NA不溶于乙醇和無(wú)水乙醚，所以實(shí)驗(yàn)步驟⑤中，離心后取沉淀物（RNA）用乙醇、無(wú)水乙醚進(jìn)行洗滌．
（3）分解核酸的酶在20～70℃溫度范圍內(nèi)活性高，會(huì)使RNA降解，所以RNA提取過(guò)程中不能在此溫度范圍內(nèi)停留的時(shí)間不能太長(zhǎng)．
（4）稀堿法提取RNA須在沸水浴進(jìn)行，因?yàn)楦邷貢?huì)使雜質(zhì)蛋白質(zhì)變性，同時(shí)使核酸水解酶失活，減少RNA的分解，這樣會(huì)獲得更多、更純凈的RNA．
（5）用植物細(xì)胞取DNA時(shí)需要研磨，但是研磨要緩慢；還需要進(jìn)入洗滌劑以瓦解細(xì)胞膜．
故答案為：
（1）細(xì)胞核、線粒體、核糖體、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì) 酵母菌在有氧和無(wú)氧條件下都能生存，屬于兼性厭氧型
（2）沉淀物
（3）分解核酸的酶在此溫度范圍內(nèi)活性高，會(huì)使RNA降解
（4）使雜質(zhì)蛋白質(zhì)變性 使核酸水解酶失活，減少RNA的分解
（5）洗滌劑

點(diǎn)評(píng)：此題考查酵母RNA的提取和鑒定，需要掌握實(shí)驗(yàn)的目的，流程及注意事項(xiàng)，考查基礎(chǔ)全面，難度較大．