Question

科學家將外源目的基因與大腸桿菌的質(zhì)粒進行重組，并在大腸桿菌中成功表達．如圖表示構(gòu)建重組質(zhì)粒和篩選含目的基因的大腸桿菌的過程．請據(jù)圖回答：

（1）步驟①和②中常用的工具酶有

 

．
（2）經(jīng)過①和②步驟后，有些質(zhì)粒上的

 

基因內(nèi)插入了外源目的基因，形成重組質(zhì)粒．
（3）步驟③是

 

的過程．
（4）步驟④：將三角瓶內(nèi)的大腸桿菌接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基C上培養(yǎng)，目的是篩選

 

．能在C中生長的大腸桿菌有

 

種．
（5）步驟⑤：用無菌牙簽挑取C上的單個菌落，分別接種到D（含氨芐青霉素和四環(huán)素）和E（含四環(huán)素）兩個培養(yǎng)基的相同位置上，一段時間后，菌落的生長狀況如圖所示．含目的基因的菌落位于（選填“D”或“E”）

 

上，請在圖中相應的位置上圈出來．

Answer 1

考點：基因工程的應用,微生物的分離和培養(yǎng)

專題：

分析：步驟①是將環(huán)狀質(zhì)粒切割開，步驟②是將目的基因與質(zhì)粒連接，步驟③是將目的基因?qū)�入受體細胞，④是對大腸桿菌進行培養(yǎng)和篩選，⑤是用選擇培養(yǎng)基進一步篩選菌落．

解答： 解：（1）將質(zhì)粒切割開用限制酶，將目的基因與質(zhì)粒連接起來用DNA連接酶．
（2）由圖中限制酶切割位置可知，目的基因插入的位置是氨芐青霉素抗性基因中．
（3）步驟③是基因工程第三步：將目的基因?qū)�入受體細胞．
（4）培養(yǎng)基C是選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中有四環(huán)素，專一篩選含四環(huán)素抗性基因的大腸桿菌，能在C中生長的大腸桿菌有兩種，分別是抗四環(huán)素和同時抗四環(huán)素和含氨芐青霉素的大腸桿菌．
（5）D培養(yǎng)基中大腸桿菌對四環(huán)素和含氨芐青霉素都抗，而E中只抗一種四環(huán)素，所以在E中對應區(qū)域（D中沒有菌落的部位），該處為轉(zhuǎn)基因大腸桿菌．
答案：
（1）限制性內(nèi)切酶、DNA連接酶
（2）氨芐青霉素抗性 
（3）將重組質(zhì)粒（目的基因）導入大腸桿菌（受體細胞） 
（4）含四環(huán)素抗性基因的大腸桿菌      2  
 （5）E

點評：本題考查轉(zhuǎn)基因大腸桿菌培養(yǎng)和篩選過程，解題的關鍵是理解選擇培養(yǎng)基的使用和篩選過程．