Question

10．據(jù)報道，從部分企業(yè)生產(chǎn)的速凍食品中檢出葡萄球菌超標(biāo)，“細(xì)菌門”事件引起公眾普遍關(guān)注．葡萄球菌能分解卵黃中的卵磷脂，在含卵黃的固體培養(yǎng)基上形成的菌落周圍會出現(xiàn)特有的乳白色的乳濁環(huán)．請回答下列問題．
（1）某興趣小組欲檢測某果汁類食品中含有葡萄球菌，請幫他們完善下列步驟．
①配制培養(yǎng)基：稱取適量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂等，加入蒸餾水，攪拌加熱至完全溶解后調(diào)節(jié)pH，分裝到錐形瓶后進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，在無菌狀態(tài)下加入卵黃液（100mL10%滅菌NaCl溶液中加一個雞蛋黃，振蕩均勻）搖勻后立即倒平板．
②接種：取待檢測果汁2.5mL加入22.5mL滅菌生理鹽水中，制成接種樣液．
實(shí)驗(yàn)組：將接種樣液用平板劃線法接種在含卵黃的固體培養(yǎng)基上．
對照組：將無菌生理鹽水用劃線法接種在含卵黃的固體培養(yǎng)基上或不接種作為空白對照．
將上述接種后的培養(yǎng)皿同時放在36℃的恒溫箱中培養(yǎng)48h．
③觀察：觀察培養(yǎng)基表面是否出現(xiàn)周圍有乳濁環(huán)的菌落．
（2）培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨為葡萄球菌生長和繁殖提供碳源和氮源．
葡萄球菌能耐受高濃度的NaCl溶液，所以在配制培養(yǎng)基時加入高濃度的NaCl溶液可以將它分離出來，此培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．
（3）若要統(tǒng)計(jì)某土壤樣品中該活菌數(shù)目，宜采用稀釋涂布平板法法，將0.2mL樣品稀釋100倍，用固體培養(yǎng)基對其培養(yǎng)，最后統(tǒng)計(jì)三個平板，菌落數(shù)分別是200、180、220．則樣品中微生物的數(shù)量為10⁵ 個/mL，該統(tǒng)計(jì)結(jié)果低于 （填“低于”或“高于”）實(shí)際值．

Answer 1

分析 1、無菌技術(shù)：消毒和滅菌

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

2、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．
3、培養(yǎng)基按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)成分	根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學(xué)藥品	依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計(jì)	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

解答 解：（1）①配制培養(yǎng)基時，分裝之后要進(jìn)行滅菌處理，而對培養(yǎng)基滅菌常用高壓蒸汽滅菌法．
②根據(jù)實(shí)驗(yàn)的單一變量原則，對照組使用平板劃線法，則實(shí)驗(yàn)組也要采用平板劃線法；空白對照組不接種，或?qū)?5ml無菌生理鹽水接種在含卵黃的固體培養(yǎng)基上．
③葡萄球菌能分解卵黃中的卵磷脂，在含卵黃的固體培養(yǎng)基上形成的菌落周圍會出現(xiàn)特有的乳白色的乳濁環(huán)．因此，觀察時，應(yīng)該觀察培養(yǎng)基表面是否出現(xiàn)周圍有乳濁環(huán)的菌落．
（2）牛肉膏和蛋白胨中含有蛋白質(zhì)，故能為葡萄球菌的生長和繁殖提供碳源和氮源；高濃度的NaCl溶液可以把葡萄球菌分離出來，故該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．
（3）接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法可用于計(jì)數(shù)活菌數(shù)目．根據(jù)題意可知，每克土壤中該細(xì)菌的含量為（200+180+220）÷3×$\frac{1}{0.2}$×100=10⁵．由于2個或多個細(xì)菌連在一起時，在平板上只能觀察到一個菌落，因此該方法統(tǒng)計(jì)結(jié)果低于實(shí)際值．
故答案為：
（1）高壓蒸汽滅菌　平板劃線　無菌生理鹽水      空白　是否出現(xiàn)周圍有乳濁環(huán)的菌落
（2）碳源和氮源　選擇
（3）稀釋涂布平板法　10⁵　低于

點(diǎn)評 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記培養(yǎng)基的基本成分、種類及功能；識記無菌技術(shù)及實(shí)例；識記接種微生物常用的兩種方法及微生物的計(jì)數(shù)方法，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．