Question

20．T-DNA可能隨機(jī)插入植物基因組內(nèi)，導(dǎo)致被插入基因發(fā)生突變．用此方法誘導(dǎo)擬南芥產(chǎn)生突變體的過(guò)程如下：種植野生型擬南芥，待植株形成花蕾時(shí)，將地上部分浸入農(nóng)桿菌（其中的T-DNA上帶有抗除草劑基因）懸浮液中以實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化．在適宜條件下培養(yǎng)，收獲種子（稱(chēng)為T(mén)₁代）．
（1）為促進(jìn)植株側(cè)枝發(fā)育以形成更多的花蕾，需要去除頂芽．
（2）為篩選出已轉(zhuǎn)化的個(gè)體，需將T₁代播種在含（一定濃度的）除草劑的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，成熟后自交，收獲種子（稱(chēng)為T(mén)₂代）．
（3）為篩選出具有抗鹽性狀的突變體，需將T₂代播種在含（一定濃度的）鹽的培養(yǎng)基上，獲得所需個(gè)體．
（4）經(jīng)過(guò)多代種植獲得能穩(wěn)定遺傳的抗鹽突變體．為確定抗鹽性狀是否由單基因突變引起，需將該突變體與野生型植株進(jìn)行雜交，再自交1代后統(tǒng)計(jì)性狀分離比．
（5）若上述T-DNA的插入造成了基因功能喪失，從該突變體的表現(xiàn)型可以推測(cè)野生型基因的存在導(dǎo)致植物的抗鹽性降低．
（6）根據(jù)T-DNA的已知序列，利用PCR技術(shù)可以擴(kuò)增出被插入的突變體基因片段．其過(guò)程是：提取植株的DNA，用DNA連接酶限制酶處理后，再用DNA連接酶將獲得的DNA片段連接成環(huán)（如圖2），以此為模板，從圖中A、B、C、D四種單鏈DNA片斷中選取B、C作為引物進(jìn)行擴(kuò)增，得到的片斷將用于獲取該基因的全序列信息．

Answer 1

分析 頂端優(yōu)勢(shì)是指頂芽?jī)?yōu)先生長(zhǎng)，而側(cè)芽受到抑制的現(xiàn)象．
因?yàn)橐獢U(kuò)增的是被插入基因片段，所以應(yīng)提取突變體植株的DNA．將DNA片段連接起來(lái)的酶是DNA連接酶．圖示中表示出了DNA合成方向是：引物A是順時(shí)針?lè)较�，那么，B、D就是逆時(shí)針?lè)较�，C也是順時(shí)針?lè)较颍�利用A、D這對(duì)引物擴(kuò)增的將是T-DNA片段，而利用B、C這對(duì)引物擴(kuò)增的才是被插入的基因片段．

解答 解：（1）頂芽的存在可導(dǎo)致頂端優(yōu)勢(shì)，進(jìn)而影響側(cè)枝上花蕾的形成，所以需要除去頂芽，以促進(jìn)植株側(cè)枝發(fā)育以形成更多的花蕾．
（2）野生型擬南芥是否被農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化，可在個(gè)體水平進(jìn)行檢測(cè)，看它是否具有抗除草劑性狀．因此可將其種植在含除草劑的培養(yǎng)基中．
（3）為篩選出具有抗鹽性狀的突變體，需將T₁代播種在含鹽的培養(yǎng)基上，獲得所需個(gè)體．經(jīng)過(guò)多代種植獲得能穩(wěn)定遺傳的抗鹽突變體．
（4）單基因突變引起的變異，其遺傳符合基因分離定律，就可用變異株與野生型植株雜交，而后自交，統(tǒng)計(jì)自交后代性狀分離比進(jìn)行判斷．如果出現(xiàn)3：1的分離比，則為單基因突變．
（5）由（3）中“抗鹽性狀的突變體”信息知：野生型基因的存在導(dǎo)致植物的抗鹽性降低．
（6）T-DNA存在于誘導(dǎo)形成的擬南芥突變體植株的DNA中．DNA連接酶可將不同的DNA片段進(jìn)行連接．因?yàn)镈NA兩條鏈反向平行，由圖示環(huán)狀DNA外側(cè)鏈DNA合成方向可判斷，DNA擴(kuò)增過(guò)程所選的引物應(yīng)為B、C，這樣可確保被插入的基因片段得到復(fù)制．要注意DNA兩條單鏈反向平行，B、C作為引物可保證插入的基因片段優(yōu)先復(fù)制．
故答案為：
（1）頂芽
（2）（一定濃度的）除草劑
（3）（一定濃度的）鹽
（4）野生型    1
（5）降低
（6）突變體    DNA連接酶       B、C

點(diǎn)評(píng) 本題以轉(zhuǎn)基因擬南芥的培養(yǎng)過(guò)程為信息載體，考查了基因工程和遺傳定律的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生的識(shí)圖能力和理解能力，具有一定的難度．