Question

13．浸花法是擬南芥轉(zhuǎn)化最常用的方法，對生長5〜6周已抽苔的擬南芥打頂來促進(jìn)側(cè)枝生長，待花序大量產(chǎn)生時(shí)將其在含有轉(zhuǎn)化輔助劑Silwet和蔗糖的農(nóng)桿菌溶液中浸泡幾分鐘，3〜4周后收取轉(zhuǎn)化植株的種子．在含有合適抗生素的平板上對種子進(jìn)行篩選，能夠健康生長的幼苗為轉(zhuǎn)基因植株．這種轉(zhuǎn)化方法不需要組織培養(yǎng)和再生植株的過程，操作簡便、轉(zhuǎn)化效率較高．回答下列問題：
（1）若要短時(shí)間內(nèi)獲得大量目的基因，可采用PCR技術(shù)；該技術(shù)用到的酶是耐熱的DNA聚合酶．
（2）基因工程中一般都需要構(gòu)建基因表達(dá)載體，原因是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能穩(wěn)定表達(dá)和發(fā)揮作用．
（3）使用農(nóng)桿菌是因?yàn)樗�含有T-DNA能插入到擬南芥染色體DNA中，并且可以穩(wěn)定的遺傳給后代．目的基因整合到擬南芥染色體DNA中，引起的變異屬于基因重組．
（4）上述操作過程用到的受體有農(nóng)桿菌、植物細(xì)胞．
（5）若要檢測轉(zhuǎn)基因擬南芥的染色體DNA上是否插入了目的基因，采用的技術(shù)是DNA分子雜交技術(shù)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）PCR技術(shù)可在體外大量擴(kuò)增目的基因；該技術(shù)是在較高溫度下進(jìn)行的，因此需要用到耐熱的DNA聚合酶．
（2）基因工程中一般都需要構(gòu)建基因表達(dá)載體，這可使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能穩(wěn)定表達(dá)和發(fā)揮作用．
（3）農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上．根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點(diǎn)，如果將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的基因整合到植物細(xì)胞中染色體的DNA上，導(dǎo)致基因重組．
（4）上述操作過程用到的受體有農(nóng)桿菌、植物細(xì)胞．
（5）若要檢測受體細(xì)胞的染色體DNA上是否插入了目的基因可采用DNA分子雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）PCR      耐熱的DNA聚合酶
（2）使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能穩(wěn)定表達(dá)和發(fā)揮作用 
（3）T-DNA      基因重組
（4）農(nóng)桿菌、植物細(xì)胞
（5）DNA分子雜交技術(shù)

點(diǎn)評 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．