Question

12．回答下列生物科技及其實(shí)踐的相關(guān)問(wèn)題：
（1）培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉時(shí)為構(gòu)建重組DNA分子通常要用同種限制酶分別切割含有目的基因的DNA和運(yùn)載體．將重組DNA轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌時(shí)，可以用Ca²⁺處理農(nóng)桿菌，使重組DNA易于導(dǎo)入．
（2）科學(xué)家利用番茄葉細(xì)胞和馬鈴薯葉細(xì)胞雜交培育“番茄-馬鈴薯”植株的過(guò)程中，首先要纖維素酶和果膠酶解除去植物細(xì)胞的細(xì)胞壁，以使植物原生質(zhì)體相互分離；在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中，使細(xì)胞分離開來(lái)的酶是胰蛋白酶．
（3）進(jìn)行早期胚胎的體外培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)液中除了含有各種有機(jī)鹽類、維生素、氨基酸、核苷酸等營(yíng)養(yǎng)成分外，還要添加激素和動(dòng)物血清．
（4）分離細(xì)菌時(shí)通常用固體培養(yǎng)基，原因是固體培養(yǎng)基可以為細(xì)菌提供表面附著和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)．與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，這些植物激素一般需要事先單獨(dú)配制成母液保存?zhèn)溆茫�使用過(guò)的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過(guò)滅菌處理后才能丟掉，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、植物體細(xì)胞雜交的具體過(guò)程：

3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件：
（1）無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物．
（2）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．
（3）溫度和PH：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4．
（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO₂（維持培養(yǎng)液的PH）．

解答 解：（1）構(gòu)建重組DNA分子時(shí)通常用同種限制酶分別切割含有目的基因的DNA和運(yùn)載體，以產(chǎn)生相同的黏性末端．將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞時(shí)常有感受態(tài)轉(zhuǎn)化法，即用Ca²⁺處理微生物細(xì)胞，使之處于易于吸收周圍環(huán)境中DNA的感受態(tài)，便于重組DNA導(dǎo)入．
（2）植物體細(xì)胞雜交過(guò)程中，首先要纖維素酶和果膠酶解除去植物細(xì)胞的細(xì)胞壁，以使植物原生質(zhì)體相互分離；在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中，使細(xì)胞分離開來(lái)的酶是胰蛋白酶．
（3）進(jìn)行早期胚胎的體外培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)液中除了含有各種有機(jī)鹽類、維生素、氨基酸、核苷酸等營(yíng)養(yǎng)成分外，還要添加激素和動(dòng)物血清．
（4）分離細(xì)菌時(shí)通常用固體培養(yǎng)基，因?yàn)楣腆w培養(yǎng)基可以為細(xì)菌提供表面附著和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)．與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，這些植物激素一般需要事先單獨(dú)配制成母液保存?zhèn)溆茫�使用過(guò)的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過(guò)滅菌處理后才能丟掉，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散．
故答案為：
（1）含有目的基因的DNA      運(yùn)載體      Ca²⁺
（2）纖維素酶和果膠       胰蛋白酶
（3）動(dòng)物血清
（4）固體培養(yǎng)基可以為細(xì)菌提供表面附著和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)       細(xì)胞分裂素     母液    滅菌

點(diǎn)評(píng) 本題綜合考查基因工程、細(xì)胞工程、微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識(shí)記基因工程的操作工具及操作步驟；識(shí)記植物體細(xì)胞雜交的具體過(guò)程及動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程；識(shí)記無(wú)菌技術(shù)及接種微生物常用的兩種方法．