Question

7．如圖是從土壤中篩選分解尿素細(xì)菌的過(guò)程，請(qǐng)回答下列問(wèn)題．

（1）圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加酚紅作指示劑，分解尿素細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間后，其菌落周圍的指示劑將變成紅色．
（2）土壤中的細(xì)菌將尿素分解為氨之后，才能被植物利用，土壤中的細(xì)菌之所以能將尿素分解，是因?yàn)榧?xì)菌能合成脲酶．
（3）制備實(shí)驗(yàn)所需的培養(yǎng)基時(shí)，在各成分都溶化后和分裝前，要進(jìn)行的是調(diào)整pH和滅菌，對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的常用方法是高壓蒸汽滅菌．倒平板時(shí)要待平板冷凝后，將平板倒置，其主要原因是防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染．
（4）在5個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為10⁵的土壤樣品溶液0.1ml，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為191、16、326、173和182．該過(guò)程采取的接種方法是稀釋涂布平板法，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為1.82×10⁸個(gè)；與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)目較少（填“多”或“少”）．

Answer 1

分析 1、培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物．
2、鑒定分解尿素的細(xì)菌：細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠產(chǎn)生脲酶，并分解尿素．
3、微生物常見(jiàn)的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．
4、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法
（1）顯微鏡直接計(jì)數(shù)法
 ①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)； ③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌．
（2）間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）
 ①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌．通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌．
②操作
a、設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性．
b、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)．
③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)．

解答 解：（1）能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素．配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長(zhǎng)的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌．分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素．
（2）分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨．
（3）制備實(shí)驗(yàn)所需的培養(yǎng)基時(shí)，在各成分都溶化后和分裝前，要進(jìn)行的是調(diào)整pH和滅菌，培養(yǎng)基用高壓蒸汽進(jìn)行滅菌．倒平板時(shí)防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染，因此要待平板冷凝后，將平板倒置．
（4）用于計(jì)數(shù)細(xì)菌菌落數(shù)的常用方法是稀釋涂布平板法，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)應(yīng)介于30～300之間，故選擇細(xì)菌菌落數(shù)為191、173和182的平板計(jì)數(shù)．每克該土壤樣品中的菌落數(shù)對(duì)應(yīng)的應(yīng)該是每毫升菌液中的細(xì)菌數(shù)目，所以每克該土壤樣品中的菌落數(shù)為$\frac{\frac{191+173+182}{3}}{\frac{10}{100}}×1{0}^{5}$=1.82×10⁸個(gè)．由于兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連接在一起時(shí)，往往統(tǒng)計(jì)的是一個(gè)菌落，所以用此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)較少．
故答案為：
（1）尿素     酚紅     紅
（2）氨     脲酶
（3）調(diào)整pH     高壓蒸汽滅菌     防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染
（4）稀釋涂布平板法     1.82    少

點(diǎn)評(píng) 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)等知識(shí)，對(duì)于此類試題，需要考生注意的細(xì)節(jié)較多，如實(shí)驗(yàn)的原理、實(shí)驗(yàn)采用的方法、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象等，需要考生在平時(shí)的學(xué)習(xí)過(guò)程中注意積累．