Question

【題目】人血清白蛋白(HSA)具有重要的醫(yī)用價值，只能從人血漿中制備。圖一是以基因工程技術(shù)獲取重組HSA的兩條途徑，其中報(bào)告基因表達(dá)的產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色。圖二為相關(guān)限制酶的識別序列和切割位點(diǎn)，以及HAS基因兩側(cè)的核苷酸序列。據(jù)圖回答下列問題：

（1）依據(jù)圖一和圖二分析，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時下列敘述錯誤的是（_____）

A．應(yīng)該使用酶B和酶C獲取HSA基因

B．應(yīng)該使用酶A和酶B切割Ti質(zhì)粒

C．成功建構(gòu)的重組質(zhì)粒含1個酶A的識別位點(diǎn)

D．成功建構(gòu)的重組質(zhì)粒用酶C處理將得到2個DNA片段

（2）PCR技術(shù)應(yīng)用的原理是____________，在利用該技術(shù)獲取目的基因的過程中，以從生物材料中提取的DNA作為模板，利用____________尋找HSA基因的位置并進(jìn)行擴(kuò)增。

（3）圖一過程①中需將植物細(xì)胞與___________混合后共同培養(yǎng)，旨在讓___________整合到植物細(xì)胞染色體DNA上；除盡農(nóng)桿菌后，還須轉(zhuǎn)接到含____________的培養(yǎng)基上篩選出轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞。

（4）圖一③過程中將目的基因?qū)�入綿羊受體細(xì)胞，采用最多，也是最為有效的方法是______________。

（5）為檢測HSA基因的表達(dá)情況，可提取受體細(xì)胞的 __________________，用抗血清白蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。

Answer 1

【答案】C DNA(雙鏈)復(fù)制 引物 農(nóng)桿菌 T-DNA 無色物質(zhì)K 顯微注射技術(shù) 蛋白質(zhì)

【解析】

基因工程的操作步驟：

1、獲得目的基因（目的基因的獲�。�

①從自然界中己有的物種中分離出來，如可從基因文庫中獲取。
②用人工的方法合成。
獲得原核細(xì)胞的目的基因可采取直接分離，獲取真核細(xì)胞的目的基因般人工合成。

人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法。

③利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因
PCR的含義：是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。

原理：DNA雙鏈復(fù)制

2、制備重組DNA分子（基因表達(dá)載體的構(gòu)建）

①重組DNA分子的組成：除了目的基因外，還必須有標(biāo)記基因。

②方法：同種限制酶分別切割載體和目的基因，再用DNA連接酶把兩者連接。

3、轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞（將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞）
①轉(zhuǎn)化的概念：是且的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和衣達(dá)的過程。 ②常用的轉(zhuǎn)化方法：

將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞：采用最多的方法是農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化技術(shù)(農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法)，其次還有基因槍法和花粉管通道技術(shù)(花粉管通道法)。

將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞：最常用的方法是顯微注射技術(shù)。此方法的受休細(xì)胞多為受精卵；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞： Ca2+處理法。
4、目的基因的檢測與鑒定
①首先要檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術(shù)。

②其次還要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，方法是采用分子雜交技術(shù)。

③最后檢測目的基因是翻譯成蛋白質(zhì)，方法是采用抗原一抗體雜交技術(shù)。

④講行個休生物學(xué)鑒定。

（1）

A、由圖中DNA序列和酶切位點(diǎn)序列可知應(yīng)使用酶B和酶C切割獲取HSA基因，A正確；

B、導(dǎo)入的目的基因時應(yīng)在T-DNA上，因此Ti質(zhì)粒應(yīng)用酶A和酶B切割，因?yàn)槊窤和酶C切出的黏性末端也能互補(bǔ)配對，可以將目的基因連接進(jìn)去，B正確；

C、成功建構(gòu)的重組質(zhì)粒含2個酶A的識別位點(diǎn)，C錯誤；

D、成功構(gòu)建的重組質(zhì)粒用酶C處理能得到2個DNA片段，應(yīng)是A-C，和C-A片段，D正確。

故選C。

（2）PCR技術(shù)應(yīng)用的原理是DNA(雙鏈)復(fù)制，在利用該技術(shù)獲取目的基因的過程中，以從生物材料中提取的DNA作為模板，利用引物尋找HSA基因的位置并進(jìn)行擴(kuò)增。

（3）圖一過程①中需將植物細(xì)胞與農(nóng)桿菌混合后共同培養(yǎng)，利用農(nóng)桿菌的侵染特性，讓T-DNA整合到植物細(xì)胞染色體DNA上；除盡農(nóng)桿菌后，為了篩選出轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞，利用重組質(zhì)粒上的報(bào)告基因表達(dá)的產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色的特性，進(jìn)行篩選，故還須將植物細(xì)胞轉(zhuǎn)接到含無色物質(zhì)K的培養(yǎng)基上。

（4）圖一③過程中將目的基因?qū)�入綿羊受體細(xì)胞，通常采用較多的方法是顯微注射技術(shù)。

（5）為檢測HSA基因的表達(dá)情況，可利用抗原抗體雜交技術(shù)，具體做法是：提取受體細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用抗血清白蛋白的抗體做雜交實(shí)驗(yàn)。