Question

16．Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞．科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療，其技術(shù)流程如圖（圖中數(shù)字序號(hào)表示的是相關(guān)過(guò)程）．請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：

（1）過(guò)程②利用的技術(shù)是早期胚胎培養(yǎng)，過(guò)程③中涉及到了基因工程技術(shù)，其中作為受體細(xì)胞的是ES細(xì)胞．
（2）過(guò)程③中獲取的目的基因是（正常的）Rag2基因，可以根據(jù)該基因的脫氧核苷酸序列（或堿基對(duì)序列或遺傳信息）設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因片段．按此方法和圖示技術(shù)流程，完成Rag2基因缺失小鼠的基因治療涉及的酶有限制性酶核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和胰蛋白酶、耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）等．
（3）圖中造血干細(xì)胞中的遺傳物質(zhì)至少有三個(gè)來(lái)源．為檢測(cè)Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)．圖中所述克隆技術(shù)屬于治療性克隆．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag₂基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療的過(guò)程圖解，其中①表示核移植過(guò)程，②表示早期胚胎培養(yǎng)過(guò)程，③表示采用基因工程技術(shù)將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞．

解答 解：（1）過(guò)程②利用的技術(shù)是早期胚胎培養(yǎng)，過(guò)程③中涉及到了基因工程技術(shù)，其中作為受體細(xì)胞的是 ES細(xì)胞．
（2）圖示利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療，可推知過(guò)程③中獲取的目的基因是（正常的）Rag2基因．步驟③中，在構(gòu)建含有Rag₂基因的表達(dá)載體時(shí)，可以根據(jù)Rag₂基因的脫氧核苷酸序列設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag₂基因片段．分離、培養(yǎng)ES細(xì)胞過(guò)程中需要用胰蛋白酶分散細(xì)胞．PCR技術(shù)擴(kuò)增過(guò)程中用耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）．基因?qū)�入過(guò)程中需要用限制性酶核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶．
（3）圖中造血干細(xì)胞中的遺傳物質(zhì)至少有3個(gè)來(lái)源：上皮細(xì)胞、卵母細(xì)胞和Rag2基因．為檢測(cè)Rag₂基因的表達(dá)情況，可采用抗原-抗體雜交法，即提取治療后的小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)（抗原），用抗Rag₂蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)．根據(jù)圖形分析可知：基因?qū)�入在體外進(jìn)行的，因此，該治療方式屬于體外基因治療．圖中所述克隆技術(shù)也屬于治療性克�。�
故答案為：
（1）早期胚胎培養(yǎng)    ES細(xì)胞
（2）（正常的）Rag2基因   脫氧核苷酸序列（或堿基對(duì)序列或遺傳信息） 胰蛋白酶、耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）
（3）三   蛋白質(zhì)  治療

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，綜合考查基因工程、細(xì)胞工程和胚胎工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)問(wèn)題；識(shí)記核移植的具體過(guò)程；識(shí)記體外受精的具體過(guò)程及早期胚胎發(fā)育的過(guò)程，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．