Question

10．如圖是獲得人乳鐵蛋白的技術(shù)路線．（圖中tetR表示四環(huán)素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamHI、HindⅢ、SmaI三種限制酶的酶切位點(diǎn)如圖所示）

據(jù)圖回答：
（1）已知人乳鐵蛋白基因的全部序列，可通過人工合成法或PCR技術(shù)獲得人乳鐵蛋白基因．據(jù)圖分析，過程①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建．，該過程需要的限制酶是HindⅢ和BamHⅠ．篩選含有重組載體的大腸桿菌，培養(yǎng)基中應(yīng)另添
加氨芐青霉素．
（2）圖中過程②最常用的方法是_顯微注射法．體外培養(yǎng)受精卵時(shí)，需將其置于含95%空氣加5% CO₂的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，C0₂的主要作用是維持培養(yǎng)液的PH．
（3）圖中過程④（填序號）表示胚胎移植，在胚胎移植前要對代孕牛進(jìn)行同期發(fā)情處理．
（4）為檢測人乳鐵蛋白基因是否成功表達(dá)，可采用抗原-抗體雜交技術(shù)．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線，包括基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等步驟，其中過程②是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞；過程④需采用胚胎移植技術(shù)．

解答 解：（1）已知人乳鐵蛋白基因的全部序列，可通過人工合成法或PCR技術(shù)獲得人乳鐵蛋白基因．過程①是基因表達(dá)載體的構(gòu)建．外源DNA分子上含有限制酶BamHI、HindIII、SmaI的切割位點(diǎn)，其中限制酶SmaI的切割位點(diǎn)位于目的基因上，所以獲取目的基因和構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)用限制酶HindⅢ和BamHⅠ．用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割質(zhì)粒后，會破壞質(zhì)粒上的四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行．
（2）過程②是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，當(dāng)受體細(xì)胞是動物細(xì)胞時(shí)，將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法．5%CO₂的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，C0₂的主要作用是維持培養(yǎng)液的PH．
（3）過程④需要采用胚胎移植技術(shù)；在胚胎移植前要對代孕牛進(jìn)行同期發(fā)情處理，使其處于相同的生理基礎(chǔ)．
（4）為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達(dá)，可采用抗原-抗體雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）PCR     基因表達(dá)載體的構(gòu)建    HindⅢ和BamHⅠ氨芐青霉素      
（2）顯微注射法   維持培養(yǎng)液的PH
（3）④同期發(fā)情
（4）抗原-抗體雜交

點(diǎn)評 本題結(jié)合乳腺生物反應(yīng)器培育過程圖和曲線圖，考查基因工程、胚胎工程、基因頻率的變化及生物進(jìn)化等知識，要求考生識記基因工程的工具和操作步驟，能準(zhǔn)確判斷圖中各過程的名稱或采用的技術(shù)；識記胚胎分割技術(shù)的理論基礎(chǔ)，能提取圖中有效信息答題．