Question

17．家蠶細(xì)胞具有高效表達外源基因能力．將人干擾素基因?qū)�入家蠶細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可以提取干擾素用于制藥．下列說法不正確的是（　�。�

• A． 家蠶細(xì)胞培養(yǎng)所需二氧化碳的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH
• B． 來自cDNA文庫的干擾素基因片段必須插入表達載體的啟動子和終止子之間
• C． 采用PCR技術(shù)擴增干擾素基因的實驗中是以干擾素基因為模板
• D． 進行轉(zhuǎn)基因操作前，需用纖維素酶短時處理幼蠶組織，以便獲得單個細(xì)胞

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、動物細(xì)胞培養(yǎng)過程：取動物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞用酶分散為單個細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)．
3、動物細(xì)胞培養(yǎng)條件：
（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物．
（2）營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．
（3）溫度和PH：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4．
（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO₂（維持培養(yǎng)液的PH）．

解答 解：A、家蠶細(xì)胞培養(yǎng)所需二氧化碳的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH，A正確；
B、來自cDNA文庫的干擾素基因片段必須插入表達載體的啟動子和終止子之間，這樣才能使目的基因正常表達，B正確；
C、采用PCR技術(shù)擴增干擾素基因的實驗中是以干擾素基因（目的基因）為模板，C正確；
D、進行轉(zhuǎn)基因操作前，需用胰蛋白酶短時處理幼蠶組織，以便獲得單個細(xì)胞，D錯誤．
故選：D．

點評 本題考查基因工程和動物細(xì)胞工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作中需要注意的細(xì)節(jié)；識記動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程，掌握動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確判斷各選項．