Question

【題目】手機高溫、潮濕的環(huán)境非常適合細菌的生長，由大腸桿菌引起的食源性疾病日漸成為社會比較關注的公共衛(wèi)生問題。為了了解手機上大腸桿菌的種類及分布情況，某興趣小組進行了如下實驗步驟。請進一步完善實驗內(nèi)容并回答相關問題：

（1）實驗步驟：

①配制含有___________、水、無機鹽的固體培養(yǎng)基，并在培養(yǎng)基中加人少量_________(使大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色）；

②從10名學生的手機正、反面采集樣品，分別接種至滅菌的培養(yǎng)基上，在37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2448h，選取_____________的菌落；

③將接種針用_____________法滅菌后，將②中選取的菌落接種到_____________(填“固體”或“液體”)培養(yǎng)基，在恒溫搖床上培養(yǎng)24h，使細菌大量繁殖；

④用_____________法將③過程所獲得的細菌接種到培養(yǎng)基上，分別統(tǒng)計菌落的種類和數(shù)目；

⑤根據(jù)菌落的特征進一步鑒定大腸桿菌的類型。

（2）上述實驗步驟中，從用途看，①所用培養(yǎng)基屬于______________培養(yǎng)基。

（3）上述實驗步驟④統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低，原因是________________。

Answer 1

【答案】碳源、氮源 伊紅一美藍 黑色 灼燒 液體 稀釋涂布（平板） 鑒別 當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落

【解析】

培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質以及氧氣的要求。伊紅-美藍培養(yǎng)基常用來鑒別大腸桿菌，其原理是大腸桿菌能分解乳糖產(chǎn)生大量的混合酸，菌體帶H+故菌落被染成深紫色，從菌落表面的反射光中還可以看到金屬光澤，在堿性環(huán)境中不分解乳糖產(chǎn)酸的細菌不著色，伊紅和美藍不能結合。培養(yǎng)基按物理性質分可分固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基一般用于微生物的鑒別、分離和計數(shù)，液態(tài)培養(yǎng)基常用于擴大化生產(chǎn)，觀察細菌運動。鑒定大腸桿菌用伊紅美藍培養(yǎng)基，根據(jù)用途劃分，該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基。用稀釋涂布平板法統(tǒng)計菌落數(shù)目時，當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個細菌，但由于兩個或多個細菌聚集在一起時長成的是一個菌落，因此統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目少，為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在.30-300的平板進行計數(shù)。

（1）①固體培養(yǎng)基除了含水、無機鹽，還需加入碳源、氮源，為了能鑒別大腸桿菌，需要加入伊紅一美藍，它會使大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色；

②從10名學生的手機正、反面采集樣品，分別接種至滅菌的培養(yǎng)基上，在37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2448h，選取黑色的菌落；

③將接種針用灼燒法滅菌后，將②中選取的菌落接種到液體培養(yǎng)基，在恒溫搖床上培養(yǎng)24h，使細菌大量繁殖；

④用稀釋涂布平板法將③過程所獲得的細菌接種到培養(yǎng)基上，分別統(tǒng)計菌落的種類和數(shù)目；

⑤根據(jù)菌落的特征進一步鑒定大腸桿菌的類型。

（2）上述實驗步驟中，從用途看，①所用培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基。

（3）上述實驗步驟④統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低，原因是當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。