Question

6．H18雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗人肝癌單克隆抗體HAb18對于人體肝癌的靶向治療具有重要的意義，但H18雜交瘤細胞在培養(yǎng)過程中的凋亡現(xiàn)象制約著細胞的高密度培養(yǎng)以及生產(chǎn)能力的提高．通過基因工程可改造H18雜交瘤細胞的抗凋亡能力，相關(guān)研究步驟如下：
①細胞培養(yǎng)：將人肝癌細胞在含10%小牛血清的培養(yǎng)液中培養(yǎng)．一段時間后，用胰蛋白酶處理培養(yǎng)液，漂洗后調(diào)整細胞懸液濃度為1×10⁷個•mL^-1．
②免疫小鼠：向小鼠體內(nèi)注射肝癌細胞懸液0.8mL，以后每隔2周免疫1次，共3次，最后一次免疫后3天，取脾臟制成細胞懸液備用．
③細胞融合及篩選：將脾臟細胞懸液和骨髓瘤細胞懸液在50%PEG作用下進行融合，篩選出能產(chǎn)生抗人肝癌單克隆抗體HAb18的H18雜交瘤細胞．
④改造H18雜交瘤細胞：利用PCR技術(shù)獲得小鼠的bcl-X_L基因（抗凋亡基因），構(gòu)建表達載體，通過脂質(zhì)體法導(dǎo)入H18雜交瘤細胞，再篩選出抗凋亡能力明顯提高的H18雜交瘤細胞．
請分析回答：
（1）步驟①肝癌細胞培養(yǎng)液中加入小牛血清的目的是補充細胞生長所需的未知營養(yǎng)物質(zhì)，培養(yǎng)液中還需加入一定量抗生素的目的是防止雜菌污染．
（2）步驟②中，肝癌細胞免疫小鼠需在一定時間內(nèi)間隔注射3次，其目的是加強免疫，刺激小鼠機體產(chǎn)生更多的淋巴細胞．
（3）步驟③中，除了用50%PEG促進細胞融合外，常用的生物誘導(dǎo)因素是滅活的病毒．步驟④中通過脂質(zhì)體法將表達載體導(dǎo)入H18雜交瘤細胞的原理是膜的流動性．
（4）與普通抗肝癌藥物相比，用抗人肝癌單克隆抗體HAb18與相應(yīng)抗癌藥物結(jié)合制成的“生物導(dǎo)彈”治療肝癌的主要優(yōu)點是能將藥物定向帶到癌細胞所在部位，減少對正常細胞的傷害，減少用藥劑量．
（5）乙醇有誘導(dǎo)細胞凋亡的作用．為了建立H18雜交瘤細胞凋亡檢測模型，科研人員利用不同濃度的乙醇溶液誘導(dǎo)H18雜交瘤細胞凋亡，其結(jié)果如圖所示．抗凋亡細胞株的建立與篩選應(yīng)選擇的條件是510mmol/L乙醇誘導(dǎo)6h．

Answer 1

分析 分析柱形圖：該實驗的自變量乙醇誘導(dǎo)的時間及乙醇的濃度，因變量是凋亡細胞的比例，根據(jù)實驗結(jié)果可知：乙醇濃度為510mmol/L，誘導(dǎo)6h～7h，細胞凋亡的比例最高．

解答 解：（1）步驟①肝癌細胞培養(yǎng)液中加入小牛血清的目的是：補充細胞生長所需的未知營養(yǎng)物質(zhì)．培養(yǎng)液中還需加入一定量抗生素的目的是：防止雜菌污染．
（2）肝癌細胞免疫小鼠需在一定時間內(nèi)間隔注射3次，其目的是強免疫，刺激小鼠機體產(chǎn)生更多的淋巴細胞．
（3）步驟③中，除了用50%PEG促進細胞融合外，常用的生物誘導(dǎo)因素是滅活的病毒，傳統(tǒng)的脂質(zhì)體是將磷脂、膽固醇或其它脂類的乙醚溶液加入到DNA溶液中，經(jīng)特殊處理而得到單層或雙層的帶DNA的脂質(zhì)體小泡，其可被受體細胞內(nèi)吞而實現(xiàn)基因轉(zhuǎn)移．步驟④中通過脂質(zhì)體法將表達載體導(dǎo)入H18雜交瘤細胞的原理是膜的流動性．
（4）與普通抗肝癌藥物相比，用抗人肝癌單克隆抗體HAb18與相應(yīng)抗癌藥物結(jié)合制成的“生物導(dǎo)彈”治療肝癌的主要優(yōu)點是：能將藥物定向帶到癌細胞所在部位，減少對正常細胞的傷害，減少用藥劑量
（5）乙醇有誘導(dǎo)細胞凋亡的作用．為了建立H18雜交瘤細胞凋亡檢測模型，科研人員利用不同濃度的乙醇溶液誘導(dǎo)H18雜交瘤細胞凋亡，其結(jié)果如圖所示．抗凋亡細胞株的建立與篩選應(yīng)選擇的條件是510mmol/L乙醇誘導(dǎo)6h，此時凋亡細胞比例最大．
故答案為：
（1）補充細胞生長所需的未知營養(yǎng)物質(zhì)    防止雜菌污染
（2）加強免疫，刺激小鼠機體產(chǎn)生更多的淋巴細胞（3）滅活的病毒   膜的流動性
（4）能將藥物定向帶到癌細胞所在部位，減少對正常細胞的傷害，減少用藥劑量
（5）510mmol/L乙醇誘導(dǎo)6h

點評 本題是探究性實驗，意在考查考生分析柱形圖，獲取實驗結(jié)論的能力，對于動物細胞培養(yǎng)條件的識記和理解能力，難度中等．