Question

2．尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，但尿素只有通過土壤中某些細菌分解為氮后，才能被植物吸收利用．分解尿素的細菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解．某同學要分離土壤中能分解尿素的細菌，并統(tǒng)計每克土壤樣品中活菌數(shù)目，培養(yǎng)基配方如下：

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4•7H2O	蛋白胨	葡萄糖	尿素	瓊脂
1.4g	2.1g	0.2g	1.0g	10.0g	1.0g	15.0g

（1）根據(jù)培養(yǎng)基的成分判斷，該同學能否分離出土壤中分解尿素的細菌？不能（填“能”或“不能”
原因是培養(yǎng)基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能選擇出只以尿素為唯一氮源的微生物．
（2）為避免培養(yǎng)皿污染，需將培養(yǎng)皿呈倒置狀態(tài)放置．為了排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，需設置接種等量無菌水的培養(yǎng)基作為空白對照．
（3）要統(tǒng)計每克土壤樣品中活菌數(shù)目，宜采用稀釋涂布平板法法接種，通過此種方法統(tǒng)計獲得的優(yōu)勢菌種的數(shù)量往往小于（填“大于”、“小于”或“等于”）優(yōu)勢菌種活菌的實際數(shù)量．
（4）一同學在純化土壤中的細菌時，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基的菌落連成一片，最可能的原因是菌液濃度過高，應當怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象？對菌液進行梯度稀釋．
（5）對能分解尿素的細菌進行了初步篩選后，還需借助生物化學方法對分離的菌種做進一步鑒定；在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑．分離并獲得菌種后，若需長期保存，應使用甘油管藏法法．

Answer 1

分析 1、選擇培養(yǎng)基的概念是：在微生物學中，將允許特定微生物種類生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱為選擇培養(yǎng)基，由于分解尿素的細菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解，因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上，分解尿素的菌能以尿素為氮源生長，而不能分解尿素的菌因缺乏氮源而無法生長．
2、常用的接種微生物的方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法，稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液涂布到固體瓊脂培養(yǎng)基上，進行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，將聚集在一起的微生物分散成單個細胞，獲得由單個細胞繁殖而來的菌落．

解答 解：（1）由圖中培養(yǎng)基的配方可知，該培養(yǎng)基中，能提供氮源的是蛋白胨和尿素，不能利用尿素的菌可以以蛋白胨為氮源生長，所以不能分離出分解尿素的菌．
（2）接種后進行培養(yǎng)時，為避免培養(yǎng)基蒸發(fā)的水蒸氣凝集后滴落在培養(yǎng)基中造成污染，需要將培養(yǎng)皿倒置．為了排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，需設置接種等量無菌水或空白的培養(yǎng)基作為空白對照．
（3）微生物常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，由于圖涂布平板時，可以確定涂布的體積，因此要統(tǒng)計每克土壤樣品中活菌數(shù)目，宜采用稀釋涂布平板法進行接種．由于菌落有可能是由兩個或多個細胞連在一起形成的，所以通過此種方法統(tǒng)計獲得的優(yōu)勢菌種的數(shù)量往往小于優(yōu)勢菌種活菌的實際數(shù)量．
（4）培養(yǎng)基上的菌落連成一片，最可能的原因是菌液沒有梯度稀釋，濃度過高．要避免此種現(xiàn)象需要對菌液進行梯度稀釋．
（5）尿素分解菌能夠產(chǎn)生脲酶使尿素分解為氨而使染液pH升高，使得酚紅指示劑顯紅色，所以可以用酚紅指示劑鑒定尿素分解菌．若需長期保存，應使用
甘油管藏法．
故答案為：
（1）不能       培養(yǎng)基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能選擇出只以尿素為唯一氮源的微生物
（2）倒置        接種等量無菌水
（3）平板劃線法       小于
（4）菌液濃度過高     對菌液進行梯度稀釋
（5）酚紅指示劑        甘油管藏法

點評 本題旨在考查學生對選擇培養(yǎng)基的選擇作用、稀釋涂布平板法和平板劃線法接種微生物、微生物培養(yǎng)的無菌操作等技術(shù)的熟練掌握和應用．