Question

如圖是將人的生長激素基因?qū)�入�?xì)菌細(xì)胞B制造工程菌的示意圖．已知細(xì)菌細(xì)胞B不含質(zhì)粒A，也不含質(zhì)粒A上的基因．質(zhì)粒A導(dǎo)入細(xì)菌細(xì)胞B后，其上的基因能得到表達(dá)．請回答下列問題
（1）目的基因可通過PCR技術(shù)獲取，這一技術(shù)中需要的酶是

 

．
（2）將目的基因與質(zhì)粒結(jié)合形成重組質(zhì)粒的過程中，需要的工具酶有

 

．
（3）若要檢測目的基因是否導(dǎo)入，可在培養(yǎng)細(xì)菌B的培養(yǎng)基中加入

 

（氨卞青霉素/四環(huán)素），若在培養(yǎng)基上觀察到大量的細(xì)菌B的菌落，表明目的基因已成功導(dǎo)入細(xì)菌B，此時所用的培養(yǎng)基屬于

 

培養(yǎng)基（按功能分）．
（4）若要比較準(zhǔn)確地了解轉(zhuǎn)化率，一般可通過統(tǒng)計菌落的數(shù)目來推測活菌數(shù)目，還可以通過

 

方法統(tǒng)計統(tǒng)計活菌數(shù)目；前者統(tǒng)計的活菌數(shù)目比實際的數(shù)目

 

（多；少；一樣），原因是

 

．為了保證統(tǒng)計數(shù)目的準(zhǔn)確，還應(yīng)該設(shè)計

 

．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：1、PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)．在模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）為條件下在體外進(jìn)行DNA復(fù)制．具體過程有：高溫變性、低溫復(fù)性、中溫延伸．
2、若細(xì)菌植入到含有四環(huán)素的培養(yǎng)基中，如果能生存，說明該菌具有含抗四環(huán)素基因的質(zhì)粒A，如果不能生存，說明該菌沒有抗四環(huán)素基因質(zhì)粒A．若細(xì)菌植入到含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中，如果能生存，說明該菌具有含抗氨芐青霉素基因的質(zhì)粒A，如果不能生存，說明該菌沒有抗氨芐青霉素基因的質(zhì)粒A．

解答： 解：（1）PCR擴(kuò)增技術(shù)是在模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物存在下，依賴于熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）促合成反應(yīng)．
（2）將目的基因與質(zhì)粒結(jié)合形成重組質(zhì)粒的過程中，需要同一種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，使他們露出相同的末端，在用DNA連接酶連接形成重組質(zhì)粒．
（3）通過抗性基因可以檢測目的基因是否導(dǎo)入．據(jù)圖可知，重組質(zhì)粒時抗氨芐青霉素基因被破壞，而抗四環(huán)素基因沒有被破壞．因此可在培養(yǎng)細(xì)菌B的培養(yǎng)基中加入四環(huán)素，若在培養(yǎng)基上觀察到大量的細(xì)菌B的菌落，表明目的基因已成功導(dǎo)入細(xì)菌B．所用的培養(yǎng)基屬于篩選用的．
（4）通過顯微鏡直接統(tǒng)計菌落的數(shù)目，通過統(tǒng)計菌落的數(shù)目來推測活菌數(shù)目比實際的數(shù)目要少．當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只有一個菌落，不是很精確，所以要設(shè)計對照實驗來確定統(tǒng)計數(shù)目的準(zhǔn)確．
故答案為：
（1）耐高溫的DNA聚合酶
（2）限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶
（3）四環(huán)素    選擇
（4）顯微鏡直接計數(shù)　　少         當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落       對照組

點評：做本題時要區(qū)分DNA連接酶和DNA聚合酶的生理功能，要正確分析抗性基因的生理作用．