Question

【題目】骨髓瘤細(xì)胞由于缺乏X酶，在HAT篩選培養(yǎng)液中不能正常合成DNA，無法生長；而B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生X酶。某科研小組制備單克隆抗體的步驟如下：

①給小鼠注射特定抗原，一段時間后獲取B淋巴細(xì)胞；

②將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞混合后，誘導(dǎo)細(xì)胞融合；

③將融合后的細(xì)胞在HAT篩選培養(yǎng)液中培養(yǎng)，獲得雜交瘤細(xì)胞；

④進(jìn)行第二次篩選；

⑤體外培養(yǎng)，獲得單克隆抗體。

回答下列問題：

（1）單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)是____________________________。給小鼠注射特定抗原的目的是使小鼠產(chǎn)生能分泌______________的B淋巴細(xì)胞。

（2）上述誘導(dǎo)細(xì)胞融合時，與誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合不同的方法是使用______________處理。細(xì)胞融合依據(jù)的原理是細(xì)胞膜具有______________。

（3）利用HAT培養(yǎng)液篩選雜交瘤細(xì)胞的原理是：①骨髓瘤細(xì)胞之間兩兩融合后，由于_____________而無法生長；②B淋巴細(xì)胞之間兩兩融合后，由于_____________而無法生長；③雜交瘤細(xì)胞由于_________________，因而能生長。

（4）第二次篩選要獲得的是_____________的細(xì)胞。

Answer 1

【答案】特異性強(qiáng)、靈敏度高、可以大量制備 特定抗體 滅活的病毒 一定的流動性 骨髓瘤細(xì)胞缺乏X酶，在HAT篩選培養(yǎng)液中不能正常合成DNA B淋巴細(xì)胞不能分裂增殖 既能產(chǎn)生X酶，在HAT篩選培養(yǎng)液中能正常合成DNA，且又能無限增殖 專一抗體檢驗(yàn)呈陽性

【解析】

單克隆抗體的制備

（1）制備產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞：向免疫小鼠體內(nèi)注射特定的抗原，然后從小鼠脾內(nèi)獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞。

（2）獲得雜交瘤細(xì)胞。

①將鼠的骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞中形成的B淋巴細(xì)胞融合；

②用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，該雜種細(xì)胞既能夠增殖又能產(chǎn)生抗體。

（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測；

（4）將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖；

（5）提取單克隆抗體：從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取。

（1）單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)、靈敏度高、可以大量制備。給小鼠注射特定抗原的目的是使小鼠產(chǎn)生能分泌特定抗體的B淋巴細(xì)胞。

（2）誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合可以通過物理方法離心、振動、電刺激，化學(xué)方法聚乙二醇，誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合除了物理方法和化學(xué)方法外，還可以使用滅活的病毒處理。細(xì)胞融合依據(jù)的原理是細(xì)胞膜具有一定的流動性。

（3）利用HAT培養(yǎng)液篩選雜交瘤細(xì)胞的原理是：①骨髓瘤細(xì)胞之間兩兩融合后，由于骨髓瘤細(xì)胞缺乏X酶，在HAT篩選培養(yǎng)液中不能正常合成DNA而無法生長；②B淋巴細(xì)胞之間兩兩融合后，由于B淋巴細(xì)胞不能分裂增殖而無法生長；③雜交瘤細(xì)胞由于既能產(chǎn)生X酶，在HAT篩選培養(yǎng)液中能正常合成DNA，且又能無限增殖，因而能生長。

（4）單克隆抗體制備過程中，第一次篩選是為了獲得雜交瘤細(xì)胞，第二次篩選要獲得的是專一抗體檢驗(yàn)呈陽性的細(xì)胞。