Question

18．家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因能力．將人干擾素基因?qū)�入家蠶細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可以提取干擾素用于制藥．
（1）進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，需用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）酶短時(shí)處理幼蠶組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞．
（2）為使干擾基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來(lái)自cDNA文庫(kù)的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的啟動(dòng)子和終止子之間．
（3）采用PCR技術(shù)可驗(yàn)證干擾素基因是否已經(jīng)導(dǎo)入家蠶細(xì)胞．PCR技術(shù)利用的原理是DNA分子的復(fù)制，該P(yáng)CR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mg²⁺）、水，4種脫氧核苷酸、模板DNA、Taq酶（耐高溫的DNA聚合酶）和（干擾素基因特異性的DNA）引物對(duì)（兩種引物）．
（4）生物反應(yīng)器培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí)會(huì)產(chǎn)生接觸抑制，所以培養(yǎng)時(shí)通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中，這樣可以增大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，也有利于空氣交換．

Answer 1

分析 解答本題從動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、基因表達(dá)載體的組成、PCR技術(shù)所需條件等知識(shí)點(diǎn)著手考慮．

解答 解：（1）為了使組織分散開為單個(gè)細(xì)胞通常用胰蛋白酶或膠原蛋白酶．
（2）基因表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、終止子、目的基因和標(biāo)記基因．啟動(dòng)子位于目的基因的首端，終止子位于目的基因的尾端．
（3）PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mg²⁺）、水、4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、TaqDNA聚合酶和一對(duì)DNA引物；在PCR反應(yīng)過(guò)程中，有一個(gè)環(huán)節(jié)是從較高的溫度冷卻到相對(duì)較低的55℃左右，其作用讓引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈上，形成局部雙鏈．
（4）利用生物反應(yīng)器培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí)，貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生接觸抑制．通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中，這樣可以增大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，也有利于空氣交換．
故答案為：
（1）胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）
（2）啟動(dòng)子     終止子
（3）DNA分子的復(fù)制        Taq酶（耐高溫的DNA聚合酶）      （干擾素基因特異性的DNA）引物對(duì) （兩種引物）
（4）增大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程、細(xì)胞工程等相關(guān)知識(shí)，著重識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和PCR技術(shù)的有關(guān)內(nèi)容，意在考查考生的識(shí)記能力和應(yīng)用能力，屬于容易題．