Question

17．啤酒酵母是啤酒工業(yè)發(fā)酵菌種，對(duì)啤酒的品質(zhì)、風(fēng)味有很大影響．請(qǐng)回答：
（1）若實(shí)驗(yàn)室中啤酒酵母菌種被雜菌污染，可采用劃線分離法進(jìn)行純化培養(yǎng)：接種時(shí)，先將接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒，待其冷卻 后，蘸取帶菌培養(yǎng)物放到新的培養(yǎng)基中．倒置培養(yǎng)皿恒溫培養(yǎng)直到出現(xiàn)單菌落，再進(jìn)行菌種鑒定．
（2）為實(shí)現(xiàn)啤酒發(fā)酵連續(xù)生產(chǎn)，酵母細(xì)胞固定化技術(shù)已在啤酒工業(yè)中廣泛應(yīng)用．例如，將啤酒酵母和海藻酸鈉混合均勻，經(jīng)CaCl₂處理形成凝膠顆粒，而酵母細(xì)胞則被固定在其內(nèi)部．這種固定化方法稱為B（A．吸附法   B．包埋法   C．交聯(lián)法   D．共價(jià)偶聯(lián)法）．
（3）科研人員將表達(dá)乙肝病毒表面抗原的基因構(gòu)建在重組質(zhì)粒中，進(jìn)而轉(zhuǎn)入啤酒酵母/受體細(xì)胞/宿主細(xì)胞，發(fā)酵生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因酵母乙肝疫苗．在構(gòu)建重組質(zhì)粒過(guò)程中，通過(guò)同種限制性核酸內(nèi)切酶（-G↓AATTC-）切割得到的一個(gè)目的基因和一個(gè)開環(huán)質(zhì)粒，共有D（A．1 個(gè)    B．2 個(gè)    C．3個(gè)D．4 個(gè)）粘性末端．將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞的操作步驟完成以后，需要對(duì)所有受體細(xì)胞進(jìn)行篩選，這是因?yàn)椴皇撬�有受體細(xì)胞都接納了重組質(zhì)粒．該轉(zhuǎn)基因技術(shù)實(shí)踐應(yīng)用的成功標(biāo)志是成功表達(dá)乙肝病毒表面抗原．
（4）轉(zhuǎn)基因技術(shù)結(jié)合胚胎工程在高等動(dòng)物育種中也有成熟應(yīng)用．人們將經(jīng)過(guò)基因改造的胚胎干細(xì)胞與去核卵細(xì)胞融合，得到重組（卵）細(xì)胞/重建“合子”，并促使其在體外分裂發(fā)育成早期囊胚/早期胚胎，再通過(guò)胚胎移植獲得后代．目前胚胎移植是胚胎工程中獲得后代的唯一方法，其原因是胚胎發(fā)育不同時(shí)期需要不同培養(yǎng)條件；目前尚無(wú)全體外胚胎培養(yǎng)技術(shù)．
（5）胚胎干細(xì)胞具有重要的生產(chǎn)和臨床醫(yī)學(xué)價(jià)值．在培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞時(shí)，首先要在培養(yǎng)皿底部制備一層細(xì)胞，稱為飼養(yǎng)層，其作用是促進(jìn)干細(xì)胞生長(zhǎng)、抑制干細(xì)胞分化．

Answer 1

分析 1、微生物常見(jiàn)的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．
2、固定化細(xì)胞：一般采用物理吸附法、化學(xué)結(jié)合法固定化酶，采用包埋法固定化細(xì)胞．
3、基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲取；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與表達(dá)．從分子水平上檢測(cè)目的基因的方法：（1）分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．

解答 解：（1）根據(jù)實(shí)驗(yàn)操作可知，該微生物分離與純化利用平板劃線法，接種時(shí)，先將接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒，待其冷卻 后，蘸取帶菌培養(yǎng)物放到新的培養(yǎng)基中．倒置培養(yǎng)皿恒溫培養(yǎng)直到出現(xiàn)單菌落，再進(jìn)行菌種鑒定．
（2）由于酵母菌細(xì)胞大，不易被吸附或化學(xué)結(jié)合，因此一般用包埋法固定酵母細(xì)胞．即將啤酒酵母和海藻酸鈉混合均勻，經(jīng)CaCl₂處理形成凝膠顆粒，而酵母細(xì)胞則被固定在其內(nèi)部．
（3）科研人員將表達(dá)乙肝病毒表面抗原的基因構(gòu)建在重組質(zhì)粒中，進(jìn)而轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞（啤酒酵母細(xì)胞），發(fā)酵生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因酵母乙肝疫苗．在構(gòu)建重組質(zhì)粒過(guò)程中，通過(guò)同種限制性核酸內(nèi)切酶（-G↓AATTC-）切割得到的一個(gè)目的基因和一個(gè)開環(huán)質(zhì)粒，目的基因和開環(huán)質(zhì)粒上分別具有兩個(gè)黏性末端，即共有4 個(gè)粘性末端．由于不是所有受體細(xì)胞都接納了重組質(zhì)粒，需要將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞的操作步驟完成以后，需要對(duì)所有受體細(xì)胞進(jìn)行篩選．該轉(zhuǎn)基因技術(shù)實(shí)踐應(yīng)用的成功標(biāo)志是成功表達(dá)乙肝病毒表面抗原．
（4）轉(zhuǎn)基因技術(shù)結(jié)合胚胎工程在高等動(dòng)物育種中也有成熟應(yīng)用．人們將經(jīng)過(guò)基因改造的胚胎干細(xì)胞與去核卵細(xì)胞融合，得到重組（卵）細(xì)胞/重建“合子”，并促使其在體外分裂發(fā)育成早期囊胚/早期胚胎，再通過(guò)胚胎移植獲得后代．由于胚胎發(fā)育不同時(shí)期需要不同培養(yǎng)條件，并且目前尚無(wú)全體外胚胎培養(yǎng)技術(shù)，因此目前胚胎移植是胚胎工程中獲得后代的唯一方法．
（5）在培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞時(shí)，首先要在培養(yǎng)皿底部制備一層細(xì)胞，稱為飼養(yǎng)層，其作用是促進(jìn)干細(xì)胞生長(zhǎng)、抑制干細(xì)胞分化．
故答案為：
（1）劃線分離法    冷卻     單菌落
（2）B
（3）啤酒酵母/受體細(xì)胞/宿主細(xì)胞     D    不是所有受體細(xì)胞都接納了重組質(zhì)粒    成功表達(dá)乙肝病毒表面抗原
（4）去核卵細(xì)胞    重組（卵）細(xì)胞/重建“合子”早期囊胚/早期胚胎    胚胎發(fā)育不同時(shí)期需要不同培養(yǎng)條件；目前尚無(wú)全體外胚胎培養(yǎng)技術(shù)
（5）飼養(yǎng)層    促進(jìn)干細(xì)胞生長(zhǎng)、抑制干細(xì)胞分化

點(diǎn)評(píng) 本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)、基因工程以及胚胎工程的有關(guān)知識(shí)，要求掌握微生物分離與純化的方法，識(shí)記基因工程的操作步驟，識(shí)記細(xì)胞核移植技術(shù)的相關(guān)操作步驟，再結(jié)合所學(xué)知識(shí)準(zhǔn)確答題．