Question

繼哺乳動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器研發(fā)成功后，膀胱生物反應(yīng)器的研究也取得了一定進(jìn)展．最近，科學(xué)家培育出一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長(zhǎng)激素并分泌到尿液中．請(qǐng)回答：
（1）將人的生長(zhǎng)激素基因?qū)�入小鼠受體細(xì)胞，常用方法是

 

．
（2）在基因工程中，將目的基因與運(yùn)載體結(jié)合時(shí)必須用

 

酶和

 

酶．常用的運(yùn)載體有

 

等，而作為運(yùn)載體必須具備相應(yīng)的條件，例如應(yīng)具有

 

以便進(jìn)行篩選．進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移時(shí)，通常要將外源基因轉(zhuǎn)入

 

中，原因是

 

．
（3）通常采用

 

技術(shù)檢測(cè)外源基因是否插入了小鼠的基因組．
（4）在研制膀胱生物反應(yīng)器時(shí)，應(yīng)使外源基因在小鼠的

 

細(xì)胞中特異表達(dá)．
（5）為使外源基因在后代長(zhǎng)期保持，可將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞的

 

轉(zhuǎn)入

 

細(xì)胞中構(gòu)成重組細(xì)胞，使其發(fā)育成與供體具有相同性狀的個(gè)體．該技術(shù)稱(chēng)為

 

．
（6）在DNA粗提取實(shí)驗(yàn)中，向在溶解DNA的NaCl溶液中，不斷加入蒸餾水的目的是
A．有利于溶解DNA        B．于溶解雜質(zhì)
C．減少DNA的溶解度      D．少雜質(zhì)的溶解度．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),DNA的粗提取和鑒定,動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)

專(zhuān)題：

分析：1、基因工程至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體．其中常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒．作為運(yùn)載體必須具備的條件：①要具有限制酶的切割位點(diǎn)； ②要有標(biāo)記基因（如抗性基因），以便于重組后重組子的篩選③能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定存在并復(fù)制；④是安全的，對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害，而且要易從供體細(xì)胞分離出來(lái)．
2、基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲取；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與鑒定．
3、DNA粗提取和鑒定實(shí)驗(yàn)中有2次加入蒸餾水，第一次的目的是使細(xì)胞吸水脹破，釋放DNA；第2次的目的是降低DNA的溶解度，使DNA分子析出．

解答： 解：（1）顯微注射法是將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞最有效的方法．
（2）在基因工程中，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，首先需用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運(yùn)載體，以形成相同的黏性末端，其次需用DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接形成重組DNA分子．基因工程常用的運(yùn)載體有質(zhì)粒、動(dòng)植物病毒、噬菌體等，而作為運(yùn)載體必須具備相應(yīng)的條件，例如應(yīng)具有標(biāo)記基因以便進(jìn)行篩選．由于受精卵（或早期胚胎細(xì)胞）具有全能性，可使外源基因在相應(yīng)組織細(xì)胞表達(dá)，因此進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移時(shí)，通常要將外源基因轉(zhuǎn)入受精卵（或早期胚胎）中．
（3）檢測(cè)外源基因是否插入了小鼠的基因組通常采用DNA分子雜交技術(shù)．
（4）在研制膀胱生物反應(yīng)器時(shí)，應(yīng)在目的基因前加入膀胱組織特異性表達(dá)的啟動(dòng)子，使外源基因在小鼠的膀胱上皮細(xì)胞中特異表達(dá)．
（5）無(wú)性繁殖能保持親本的遺傳特性，因此為使外源基因在后代長(zhǎng)期保持，應(yīng)采用無(wú)性繁殖的方法，如核移植技術(shù)（克�。�，即將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞的細(xì)胞核轉(zhuǎn)入去核的卵細(xì)胞中構(gòu)成重組細(xì)胞，使其發(fā)育成與供體具有相同性狀的個(gè)體．
（6）在DNA粗提取實(shí)驗(yàn)中，向在溶解DNA的NaCl溶液中，不斷加入蒸餾水的目的是減少DNA的溶解度，使DNA分子逐漸析出．
故答案為：
（1）顯微注射
（2）同種限制酶   DNA連接酶   質(zhì)粒（或動(dòng)植物病毒或噬菌體等）   標(biāo)記基因    受精卵（或早期胚胎）   受精卵（或早期胚胎細(xì)胞）具有全能性，可使外源基因在相應(yīng)組織細(xì)胞表達(dá)
（3）DNA分子雜交（核酸探針）
（4）膀胱上皮
（5）細(xì)胞核   去核的卵    核移植（或克隆）
（6）C

點(diǎn)評(píng)：本題綜合考查基因工程技術(shù)、核移植技術(shù)、DNA的粗提取和鑒定，要求考生識(shí)記基因工程的原理、使用工具、操作步驟及應(yīng)用；識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)及應(yīng)用；識(shí)記DNA粗提取和鑒定的原理及操作步驟，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．