Question

19．黃曲霉毒素B₁（AFB1）存在于被黃曲霉菌污染的飼料中，它可以通過食物鏈進入動物體內(nèi)并蓄積，引起瘤變．某些微生物能合成AFB1解毒酶．將該酶添加在飼料中可以降解AFB1，清除其毒性．如圖為采用基因工程技術(shù)生產(chǎn)AFB1解毒酶的流程圖：

請回答：
（1）基因工程操作的關(guān)鍵步驟是基因表達載體的構(gòu)建，運載工具（體）有質(zhì)粒，動植物病毒，λ噬菌體的衍生物類型；
（2）將目的基因?qū)�入酵母細胞，最常用的化學(xué)方法是感受態(tài)轉(zhuǎn)化法；
（3）酵母細胞導(dǎo)入AFB1解毒酶基因后，采用DNA分子雜交技術(shù)，檢測到AFB1解毒酶基因存在酵母細胞內(nèi)．實驗發(fā)現(xiàn)酵母菌中沒有檢測到合成的AFB1解毒酶，分析原因可能是該基因未轉(zhuǎn)錄．檢測酵母菌工程菌是否合成了AFB1解毒酶．應(yīng)采用抗原-抗體雜交方法．
（4）采用蛋白質(zhì)工程進一步改造該酶的基本途徑是：從提高酶的活性出發(fā)，設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，推測應(yīng)有的氨基酸序列，找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示表示采用基因工程技術(shù)生產(chǎn)AFB₁解毒酶的流程，Ⅰ表示提取總RNA的過程，并以此為模板逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；Ⅱ表示采用PCR技術(shù)體外擴增目的基因的過程．

解答 解：（1）基因工程操作的關(guān)鍵步驟是基因表達載體；基因工程的運載工具（體）有質(zhì)粒，動植物病毒，λ噬菌體的衍生物．
（2）將目的基因?qū)�入微生物細胞常用感受態(tài)轉(zhuǎn)化法．
（3）檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細胞后，常用DNA分子雜交技術(shù)；實驗發(fā)現(xiàn)酵母菌中沒有檢測到合成的AFB1解毒酶，其原因可能是該基因未轉(zhuǎn)錄．檢測目的基因是否表達，應(yīng)該采用抗原-抗體雜交方法．
（4）采用蛋白質(zhì)工程進一步改造該酶的基本途徑是：從提高酶的活性出發(fā)，設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，推測應(yīng)有的氨基酸序列，找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列．
故答案為：
（1）基因表達載體的構(gòu)建      質(zhì)粒、λ噬菌體的衍生物、動植物病毒
（2）感受態(tài)轉(zhuǎn)化法
（3）DNA分子雜交      該基因未轉(zhuǎn)錄      抗原-抗體雜交
（3）脫氧核苷酸序列

點評 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)；識記蛋白質(zhì)工程的基本途徑，能結(jié)合所學(xué)的知識準確答題，屬于考綱識記層次的考查．