Question

【題目】研究人員從健康人腸道中分離篩選出乳酸桿菌，并對其進(jìn)行體外益生特性（人工胃液耐受性、抑菌活性等）的研究�；卮鹣铝袉栴}：

（1）乳酸桿菌培養(yǎng)基的配方中應(yīng)含有水、_______________和無機(jī)鹽這四類物質(zhì)及維生素等。為便于形成菌落，該培養(yǎng)基應(yīng)為________培養(yǎng)基，配制時(shí)應(yīng)加入適量凝固劑——_______。培養(yǎng)基宜采用__________法進(jìn)行滅菌，以殺死培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基中的所有微生物，包括_______、__________。

（2）要對乳酸桿菌進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，應(yīng)采用的接種方法是_____________________，接種后必須置于適宜溫度及__________（填“有氧”或“無氧”）條件下培養(yǎng)，所得菌落數(shù)比實(shí)際活菌數(shù)偏低的原因是__________________________________________________________。

（3）乳酸桿菌的抑菌活性研究：

用分離得到的三株乳酸桿菌對腸道中的三種其他細(xì)菌進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如下表。

抑菌圈直徑（mm） 細(xì)菌種類 乳酸桿菌菌株	大腸桿菌	糞腸球菌	金黃色葡萄球菌
LpMT－3	9.67	17.5	15.83
LpMT－5	9.17	18.5	16.17
LsAF－7	12.67	19.67	15.9

注：抑菌圈是乳酸桿菌在生活過程中分泌某些物質(zhì)對其周圍的其他細(xì)菌的生長產(chǎn)生抑制作用形成的透明圈。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，對糞腸球菌抑制作用最強(qiáng)的是__________菌株；乳酸桿菌對___________菌的抑制能力最弱。

（4）乳酸桿菌對人工胃液的耐受性研究：

①配制適宜濃度的胃蛋白酶溶液，滴加HCl調(diào)節(jié)pH至酸性制成人工胃液。宜采用下列____方法（填選項(xiàng)對應(yīng)的字母）對人工胃液進(jìn)行除菌，之后進(jìn)行乳酸桿菌耐受性測定。

A．過濾 B．干熱滅菌 C．灼燒滅菌 D．酒精消毒

②胃液pH值在空腹時(shí)可低至1.5，正常飲食后胃液pH為3.0-5.0。食物在胃中停留時(shí)間約為1-2 h。研究發(fā)現(xiàn)，乳酸桿菌在pH為2.0的人工胃液中處理2h后的存活率幾乎為0，而在pH為3.0的人工胃液中處理2 h后的存活率為86.65%。這一研究結(jié)果提示我們食用含有乳酸桿菌的酸奶應(yīng)避免在____________時(shí)食用。

Answer 1

【答案】氮源和碳源 固體 瓊脂 高壓蒸汽 芽孢 孢子 稀釋涂布平板法 無氧 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)活菌細(xì)胞連在一起，形成菌落時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落 LsAF－7 大腸桿菌 A 空腹

【解析】

1、培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。根據(jù)化學(xué)成分分為合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基等根據(jù)用途分選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基；根據(jù)性質(zhì)分為液體、半固體和固體培養(yǎng)基。

2、對微生物計(jì)數(shù)的方法：①間接計(jì)數(shù)法，即稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。該方法可以根據(jù)形成的菌落數(shù)量對菌體進(jìn)行計(jì)數(shù)，由于菌落都是由活菌形成的，故該方法計(jì)數(shù)的都是活菌，由于菌落并不都是標(biāo)準(zhǔn)菌落，有的由少數(shù)幾個(gè)細(xì)胞增殖形成的，因此該方法往往計(jì)數(shù)結(jié)果比實(shí)際結(jié)果偏低。

②顯微鏡計(jì)數(shù)法：即利用血球計(jì)數(shù)板和顯微鏡對微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)的方法，該方法計(jì)數(shù)的包括死菌和活菌在內(nèi)，因此計(jì)數(shù)結(jié)果往往比實(shí)際結(jié)果偏高。

3、消毒和滅菌：

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

（1）根據(jù)培養(yǎng)基的成分可知，乳酸桿菌培養(yǎng)基的配方中應(yīng)含有水、碳源和氮源、無機(jī)鹽這四類物質(zhì)，以及添加維生素作為生長因子等。為便于形成菌落，該培養(yǎng)基應(yīng)為固體培養(yǎng)基，配制時(shí)需要加入瓊脂作為凝固劑。培養(yǎng)基配制后需要采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌處理，以殺死培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基中的所有微生物，包括芽孢和孢子。

（2）稀釋涂布平板法可以對活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，故采用的接種方法是稀釋涂布平板法，由于乳酸菌屬于厭氧菌，因此接種后必須置于適宜溫度及無氧的條件下培養(yǎng)，該計(jì)數(shù)方法是通過形成的菌落數(shù)目對菌體進(jìn)行間接的計(jì)數(shù)，由于形成的菌落并不都是標(biāo)準(zhǔn)菌落，當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)活菌細(xì)胞連在一起，形成菌落時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，因此該計(jì)數(shù)方法導(dǎo)致所得菌落數(shù)比實(shí)際活菌數(shù)偏低。

（3）根據(jù)題意可知，抑菌圈是乳酸桿菌在生活過程中分泌某些物質(zhì)對其周圍的其他細(xì)菌的生長產(chǎn)生抑制作用形成的透明圈。分析表格中的數(shù)據(jù)可知，LsAF－7抑制糞腸球菌的作用最強(qiáng)，形成的抑菌圈直徑最大。標(biāo)中數(shù)據(jù)顯示乳酸桿菌對大腸桿菌的抑制作用最弱，形成的抑菌圈直徑相對最小。

（4）①人工胃液為非無菌溶液，如果對其有無菌要求，應(yīng)注意采用0.22μm過濾除菌操作。綜上所述，A正確，B、C、D錯(cuò)誤。

②根據(jù)題意，胃液pH值在空腹時(shí)可低至1.5，正常飲食后胃液pH為3.0-5.0。而乳酸桿菌在pH為2.0的人工胃液中處理2h后的存活率幾乎為0，而在pH為3.0的人工胃液中處理2 h后的存活率為86.65%。因此我們避免空腹食用含有乳酸桿菌的酸奶。