Question

13．回答下列關于遺傳信息的傳遞與表達的問題
為了探究基因在高等動物體內不兩發(fā)育階段和不同類型的細胞中表達的持異性，通常以綠色熒光蛋白編碼基因（GFP）作為目的基因構建轉基因動物．
（1）獲得GFP基因的方法一般包括從相關生物細胞中分離和人工化學合成．
（2）若使用限制酶PstI（識別序列和切割位點如圖2A所示）切開GFP，其產生的末端應該為圖1中D．

（3）已知圖2B所示質粒經EcoRI和AatII聯(lián)合酶切后形成1.0kb和3.2kb （1kb=1000對堿基）兩種DNA片段，若將0.8kb的單個基因插在質粒的PstI位點處，所形成的重組質粒用EcoRI和AatII聯(lián)合酶切后，能形成兩種DNA片段，其大小應分別為1.8kb和3.2kb．
（4）將上述重組質粒導入小鼠受精卵雄性原核中的常規(guī)方法是顯微注射．
（5）經上述受精卵移植發(fā)育而成且頭部發(fā)熒光的轉基因小鼠中，全身各種組織或細胞均含有的物質是A．
①GFP基因   ②GFPmRNA   ③GFP蛋白
A．①B．①②C．②③D．①②③

Answer 1

分析 1、基因工程的工具：
（1）限制酶：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．
（2）DNA連接酶：連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵．
（3）運載體：常用的運載體：質粒、噬菌體的衍生物、動植物病毒．
2、基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）GFP基因為目的基因，獲得GFP基因的方法一般包括：從相關生物細胞中分離和人工化學合成．
（2）限制酶PstI的識別序列及切割位點為：，因此用限制酶PstI切開GFP，其產生的末端應該為．
（3）已知圖2B所示質粒經EcoRI和AatII聯(lián)合酶切后形成1.0kb和3.2kb （1kb=1000對堿基）兩種DNA片段，若將0.8kb的單個基因插在質粒的PstI位點處，所形成的重組質粒用EcoRI和AatII聯(lián)合酶切后，能形成兩種DNA片段，其大小應分別為1.0+0.8=1.8kb和3.2kb．
（4）將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法．
（5）轉基因小鼠體內的所有細胞都是由受精卵有絲分裂形成的，因此都含有GFP基因，但由于基因的選擇性表達，該基因只在頭部細胞中才表達，則只有頭部細胞中采用相應的mRNA和蛋白質．
故答案為：
（1）從相關生物細胞中分離      人工化學合成
（2）D          
（3）1.8     3.2
（4）顯微注射        
（5）A

點評 本題結合圖解，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的概念、原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結合圖中信息準確答題．