Question

【題目】環(huán)保人員發(fā)現(xiàn)，工業(yè)污水中有一種極難降解的含氮有機(jī)物NS（無色的NS與碘作用可形成藍(lán)色反應(yīng)），但可被NS分解菌高效降解。請(qǐng)分析回答下列問題：

（1）欲得到能高效降解NS分解菌，可以選擇__________的環(huán)境采集樣品分離所需細(xì)菌，在篩選NS分解菌的過程中，以__________為唯一氮源，該培養(yǎng)基屬于__________培養(yǎng)基，若要對(duì)NS分解菌加以純化并計(jì)數(shù)，可采用的接種方法是__________。

（2）實(shí)驗(yàn)室采用此方法，將1mL樣品稀釋100倍，在3個(gè)平板上分別接人0.1mL稀釋液；經(jīng)正確操作培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為150、158和145。據(jù)此可得出毎升樣品中的活菌數(shù)__________（填“至多”或“至少”）為__________個(gè)。

（3）為排除雜菌污染，應(yīng)設(shè)置的對(duì)照實(shí)驗(yàn)是__________。

（4）欲鑒定篩選得到的NS分解菌是否具有實(shí)用價(jià)值，在培養(yǎng)NS分解菌的培養(yǎng)基中除了加入必需營養(yǎng)物質(zhì)外還需要加入__________用于顏色反應(yīng)鑒別NS分解菌。若用上述培養(yǎng)基比較不同菌株NS降解能力的大小，請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路補(bǔ)充完整：用含有__________培養(yǎng)不同菌株，一定時(shí)間后，通過測定_________來確定不同菌株降解NS能力的大小。

Answer 1

【答案】被工業(yè)污水污染的水體 含氮有機(jī)物（NS）選擇稀釋余布平板法至少1.51×108不接種的空白培養(yǎng)基碘液相同NS濃度的上述培養(yǎng)基菌落周圍透明圈的大�。ɑ颉爸睆健保�

【解析】

分離菌株的思路：(1)自然界中目的菌株的篩選；①依據(jù)：根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。②實(shí)例：PCR技術(shù)過程中用到的耐高溫的Taq DNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出來的Taq細(xì)菌中提取出來的。(2)實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選①原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法：(1)稀釋涂布平板法（間接），①當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。②通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)來推測樣品中大約含有的活菌數(shù)。 (2)利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)。

（1）篩選相應(yīng)的菌株應(yīng)該到其生存環(huán)境去尋找，由于工業(yè)污水中有一種極難降解的含氮有機(jī)物NS，但可被NS分解菌高效降解，因此欲得到能高效降解NS分解菌，可以選擇被工業(yè)污水污染的水體的環(huán)境采集樣品分離所需細(xì)菌，據(jù)題意可知，NS分解菌高效降解含氮有機(jī)物NS，因此篩選NS分解菌的過程中，以含氮有機(jī)物（NS）為唯一氮源，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，若要對(duì)NS分解菌加以純化并計(jì)數(shù)，可采用的接種方法是稀釋余布平板法。

（2）將1mL樣品稀釋100倍，在3個(gè)平板上分別接人0.1mL稀釋液；經(jīng)正確操作培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為150、158和145。由于兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，據(jù)此可得出毎升樣品中的活菌數(shù)至少為（150+158+145）÷3÷0.1×100×1000=1.51×108 個(gè)。

（3）為排除雜菌污染，應(yīng)設(shè)置的對(duì)照實(shí)驗(yàn)是不接種的空白培養(yǎng)基。

（4）由于無色的NS與碘作用可形成藍(lán)色反應(yīng)，因此在培養(yǎng)NS分解菌的培養(yǎng)基中除了加入必需營養(yǎng)物質(zhì)外，還需要加入碘液用于顏色反應(yīng)鑒別NS分解菌。若用上述培養(yǎng)基比較不同菌株NS降解能力的大小，可用含相同NS濃度的上述培養(yǎng)基，培養(yǎng)不同菌株，一定時(shí)間后，通過測定菌落周圍透明圈的大小（或“直徑”） 來確定不同菌株降解NS能力的大小。