Question

正常細胞中含有抑癌的P53基因，能表達抗病毒蛋白，幫助修復(fù)輕度變異的基因，也能使重度變異的細胞發(fā)生凋亡而避免腫瘤發(fā)生；若它失活而不能表達，則基因突變的細胞易形成腫瘤．基因治療腫瘤是根本的方法，腺病毒以其嗜好增殖細胞和對人體基本無害而成為良好的基因載體．野生型腺病毒含有抑制P53 基因活性的55Kda基因，以及病毒復(fù)制基因E1，因此需要重新構(gòu)建有療效的、安全的腺病毒．圖甲、乙中箭頭所指為相應(yīng)限制酶切點．

（1）構(gòu)建重組腺病毒時，限制酶最好選擇

 

，這樣既可以去除

 

基因以防止病毒復(fù)制后損傷健康細胞，同時還能破壞

 

基因以防止其

 

．
（2）將目的基因與腺病毒重組時，重組的成功率較低，依然還有大量非重組的野生型病毒的DNA，這是因為

 

．
（3）要獲得更多重組病毒，采用的方法是：獲取人體某腫瘤細胞→將E1 基因?qū)�入腫瘤細胞的基因組中→重組病毒侵染含E1基因的腫瘤細胞→體外培養(yǎng)侵染的細胞．該過程中利用腫瘤細胞能不斷復(fù)制的特點可以為病毒提供更多的生活場所，那么選用含E1基因的腫瘤細胞進行重組病毒侵染的理由是

 

．篩選重組病毒，可采用離心分層純化法，其依據(jù)是

 

．
（4）某DNA 分子片段含有1000 個堿基對．經(jīng)擴增后，分別只用限制酶EcoRI 與同時用EcoRI和HalⅢ兩種方法切割，其電泳結(jié)果如圖丙所示，可推斷限制酶HalⅢ在該DNA片段上的切割點有

 

 個．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：分析題圖：圖甲為野生型腺病毒DNA，其中含有抑制P53基因活性的55Kda基因，以及病毒復(fù)制基因E1，因此構(gòu)建基因表達載體時應(yīng)破壞或去除55Kda基因和基因E1；圖乙為人體DNA片段，其中P53基因為目的基因．要獲得目的基因（P53基因），同時還要破壞或去除55Kda基因和基因E1，應(yīng)選用EcoRI和BamHI切割載體和含有目的基因的DNA．

解答： 解：（1）根據(jù)題干信息“野生型腺病毒含有抑制P53基因活性的55Kda基因，以及病毒復(fù)制基因E1”可知，構(gòu)建基因表達載體時，應(yīng)選用EcoRI和BamHI切割載體和含有目的基因的DNA，這樣既可以去除E1基因以防止病毒復(fù)制后損傷健康細胞，同時還能破壞55Kda基因以防止其抑制P53基因的活性．
（2）由于切下片段有可能與原基因重新結(jié)合，因此將目的基因與腺病毒重組時，重組的成功率較低，依然還有大量非重組的野生型病毒的DNA．
（3）選用含E1基因的腫瘤細胞進行重組病毒侵染，可以讓病毒僅在含有E1基因的腫瘤細胞中復(fù)制，而在不含E1的人體正常細胞中不能復(fù)制，提高安全性．重組病毒與非重組病毒的DNA分子長度不同，質(zhì)量（密度）也不同，因此篩選重組病毒時，可采用離心分層純化法．
（4）只用限制酶EcoRI切割能產(chǎn)生700kb、200kb和100kb三種長度的DNA片段，同時用EcoRI和HalⅢ兩種酶切割可產(chǎn)生420kb、280kb和100kb三種長度的DNA片段，可見，限制酶HalⅢ又將長度為700Kb的DNA片段切成420kb和280kb兩段，將長度為200kb的DNA片段切成100kb的兩段，由此可推斷限制酶HalⅢ在該DNA片段上的切割位點有2個．
故答案為：
（1）EcoRI和BamHI     E1    55Kda   抑制P53基因的活性
（2）切下片段有可能與原基因重新結(jié)合
（3）可以讓病毒僅在含有E1基因的腫瘤細胞中復(fù)制，而在不含E1的人體正常細胞中不能復(fù)制，提高安全性   重組病毒與非重組病毒的DNA分子長度不同，質(zhì)量（密度）也不同 
（4）2

點評：本題結(jié)合圖解，考查基因工程的技術(shù)和原理，要求考生識記基因工程的工具及操作步驟，能根據(jù)圖甲和圖乙中的限制酶分布位點及題干信息“野生型腺病毒含有抑制P53基因活性的55Kda基因，以及病毒復(fù)制基因E1”選擇合適的限制酶；能根據(jù)電泳結(jié)果圖推斷限制酶HalⅢ切割位點數(shù)目．