Question

10．人類有許多疾病是由細菌或病毒導致的．因此水在飲用前的檢驗是有效監(jiān)控疾病發(fā)生的必要措施，請回答下列有關問題：
（1）檢驗大腸桿菌的含量時，通常將水樣進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的水樣用涂布器分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，記錄菌落數(shù)量，這種方法稱為稀釋涂布平板法，所用的培養(yǎng)基需要滅菌，其常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法．
（2）用該方法統(tǒng)計樣本菌落數(shù)時是否需要設置對照組？需要，為什么？因為需要判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染（培養(yǎng)基滅菌是否合格）．此方法統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目少．
（3）若分別取0.1mL已稀釋10³倍的水樣分別涂布到三個瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，培養(yǎng)基記錄到大腸桿菌的菌落數(shù)分別為55、56、57，則每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為5.6×10⁸．已知大腸桿菌能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣，現(xiàn)提供足量的已滅菌的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液和具塞試管，用以判斷待檢水樣中是否含有大腸桿菌：通過無菌操作向試管內注入一定量待檢水樣，再注入已滅菌的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液將試管充滿，塞上塞子，混勻后置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24小時．試管內出現(xiàn)氣泡現(xiàn)象說明水樣中有大腸桿菌．

Answer 1

分析 1、稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列梯度稀釋，然后將不同梯度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基上，進行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液離，聚集在一起的微生物被分散成單個細胞，從而獲得由單細胞繁殖而來的菌落．
2、對微生物進行分離、計數(shù)常用的接種方法是稀釋涂布平板法，估算每毫升樣品中的細菌數(shù)時，往往選取30～300的平板，取至少三個平板的平均值，每毫升樣品中的細菌數(shù)=（平板的平均菌落數(shù)÷涂布的體積）×稀釋的倍數(shù)．

解答 解：（1）根據(jù)題干信息“將水樣進行一系列的梯度稀釋”、“將不同稀釋度的水樣用涂布器分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)”、“記錄菌落數(shù)量”，該方法為稀釋涂布平板法；培養(yǎng)基一般采用高壓蒸汽滅菌法滅菌．
（2）由于需要判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染（培養(yǎng)基滅菌是否合格），利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計樣本菌落數(shù)時需要設置對照組，即將空白培養(yǎng)基放在相同條件培養(yǎng)．當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，因此運用活菌計數(shù)法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低．
（3）根據(jù)題干中提供數(shù)據(jù)，每升原水樣中大腸桿菌數(shù)=（55+56+57）÷3÷0.1×10³×10³=5.6×10⁸．判斷待檢水樣中是否含有大腸桿菌：通過無菌操作向試管內注入一定量待檢水樣，再注入已滅菌的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液將試管充滿，塞上塞子，混勻后置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24小時．由于“大腸桿菌能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣”，因此試管內出現(xiàn)氣泡現(xiàn)象說明水樣中有大腸桿菌．
故答案為：
（1）稀釋涂布平板法     高壓蒸汽滅菌法
（2）需要     因為需要判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染（培養(yǎng)基滅菌是否合格）     少
（3）5.6×10⁸       已滅菌的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液      氣泡

點評 本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)的有關知識，要求考生能夠掌握微生物分離與純化的兩種方法，掌握無菌技術的主要內容，再結合題干信息計算大腸桿菌數(shù)，難度適中．