Question

【題目】大腸桿菌是人和許多動(dòng)物腸道中最主要且數(shù)量最多的一類細(xì)菌，含有2000種以上的蛋白質(zhì)；大腸桿菌的數(shù)量是檢測(cè)自來(lái)水是否受糞便污染的最直接的指標(biāo)。回答下列問(wèn)題：

（1）利用凝膠色譜法分離提取到的部分大腸桿菌蛋白質(zhì)時(shí)，等樣品完全進(jìn)入凝膠層后，加入pH為7.0、濃度為20mmol/L的___________ 到適當(dāng)高度進(jìn)行洗脫，結(jié)果甲蛋白質(zhì)先洗脫出來(lái)，乙蛋白質(zhì)后洗脫出來(lái)，則相對(duì)分子質(zhì)量較大的是_____蛋白質(zhì)。

（2）通過(guò)濾膜法可以測(cè)定自來(lái)水中大腸桿菌的數(shù)目：一定體積的自來(lái)水樣過(guò)濾后，將濾膜放在伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、瓊脂、乳糖、伊紅和美藍(lán)水溶液）上培養(yǎng)，大腸桿菌的代謝產(chǎn)物能與伊紅-美藍(lán)反應(yīng)，使菌落呈黑色。根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的數(shù)目，計(jì)算出大腸桿菌的數(shù)量。

①伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基屬于____（填“選擇”或“鑒別”）培養(yǎng)基，蛋白胨的作用有 _________。

②在微生物培養(yǎng)過(guò)程中，常用的滅菌方法有灼燒滅菌、________和高壓蒸汽滅菌。配制伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基時(shí)，乳糖需要單獨(dú)在壓力為70kPa，溫度為115℃滅菌20min，原因是__________。接種前通常需要檢測(cè)固體培養(yǎng)基是否滅菌合格，檢測(cè)方法是___________。

③濾膜法是根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的數(shù)目來(lái)推測(cè)樣品中的活菌數(shù)，其原理是_______________。

Answer 1

【答案】磷酸緩沖液 甲 鑒別 提供碳源、氮源、維生素 干熱滅菌 乳糖在高溫下會(huì)破壞 將未接種的培養(yǎng)基在適宜的條件下放置一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落出現(xiàn) （當(dāng)樣品中細(xì)菌濃度低時(shí)，）培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落來(lái)源于樣品中的一個(gè)活菌

【解析】

閱讀題干信息可知，本題所以大腸桿菌為實(shí)驗(yàn)材料，考查蛋白質(zhì)的提取與鑒定實(shí)驗(yàn)、測(cè)定自來(lái)水中大腸桿菌的數(shù)目實(shí)驗(yàn)，回憶和梳理相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，據(jù)此答題。

（1）利用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時(shí)，等樣品完全進(jìn)入凝膠層后，需要加入pH為7.0、濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度進(jìn)行洗脫，若甲蛋白質(zhì)先洗脫出來(lái)，乙蛋白質(zhì)后洗脫出來(lái)，說(shuō)明甲蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量較大。

（2）①伊紅-美藍(lán)可以將大腸桿菌染成深紫色，因此伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基，其中蛋白胨可以為大腸桿菌提供碳源、氮源、維生素。

②微生物培養(yǎng)過(guò)程中，常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。由于乳糖在高溫下會(huì)破壞，所以在配制伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基時(shí)，乳糖需要單獨(dú)在壓力為70kPa，溫度為115℃滅菌20min。接種前通常需要將未接種的培養(yǎng)基在適宜的條件下放置一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落出現(xiàn)，以檢測(cè)固體培養(yǎng)基是否滅菌合格。

③濾膜法是根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的數(shù)目來(lái)推測(cè)樣品中的活菌數(shù)，其原理是培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落來(lái)源于樣品中的一個(gè)活菌。